外源褪黑素对黄瓜叶片衰老的缓解效应

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为了探讨外源褪黑素(N-乙酰-5-甲氧基色胺,melatonin,MT)对黄瓜叶片衰老的缓解效应,以‘硕丰210号’黄瓜(Cucumis sativus L.)为试材,研究不同叶龄(7d、14d、21d、28d、35d和42d)黄瓜叶片内源MT含量及其合成关键基因表达量的变化规律,探明MT与叶片衰老的关系;在此基础上,以清水处理为对照(CK),研究叶面喷施100μmol·L-1MT对不同叶龄叶片叶绿素代谢、光合功能、抗氧化系统及黄瓜生长、产量的影响,揭示外源MT缓解黄瓜叶片衰老的生理机制。主要研究结果如下:1.随着黄瓜叶片叶龄的增加,内源MT关键合成酶色氨酸脱羧酶(TDC)、N-乙酰基-5-羟色胺甲基转移酶(ASMT)和色胺-5-羟化酶(T5H)m RNA表达及内源MT含量均显著上调,这说明内源MT参与调控叶片的自然衰老进程。2.丙二醛(MDA)含量和电解质渗漏率(EL)随叶龄的增加而增加,但MT处理的MDA含量和EL始终低于清水对照;在7-28d叶龄时,衰老相关基因(SAG20)和细胞程序性死亡相关基因(PDCD)的m RNA相对表达量变化幅度较小,至35d叶龄时,SAG20和PDCD的m RNA相对表达量均显著上调,但与清水对照相比,MT处理下二者的表达量均显著降低,这说明MT可以参与调控黄瓜叶片的衰老。3.在黄瓜叶片衰老过程中,叶绿素a和b含量均呈现出先升高后下降的趋势,在28d叶龄时达到最大值,叶绿素合成关键酶植物镁离子螯合酶(Mg CH)和植物亚铁离子螯合酶(Fe CH)活性、叶绿素降解关键酶脱镁叶绿素水解酶(PPH)和脱镁叶绿酸a加氧酶(PAO)活性及相对表达量的变化趋势与叶绿素含量相似;与H2O处理相比,外源MT可以显著增加衰老叶片中Mg CH、Fe CH活性,降低PPH和PAO的活性及其m RNA表达进而增加叶绿素含量。4.MT处理可显著提高黄瓜功能叶和衰老叶光合速率(Pn)、Rubisco最大羧化速率(Vc,max)、核酮糖-1,5-二磷酸最大再生速率(Jmax),以及光下实际光化学效率(ΦPS II)、暗下光系统II(PS II)最大光化学效率(Fv/Fm)、光化学猝灭系数(q P)和电子传递效率(ETR),明显降低非光化学猝灭系数(NPQ)。此外,OJIP曲线中J点(30ms)的相对可变荧光(VJ)和I点(30ms)的相对可变荧光(VI)在35d叶龄之前随着叶龄的增加趋于下降,35d后叶片开始衰老,VJ和VI显著上升,而单位面积有活性的反应中心的数量(Rc/Cm)、用于电子传递的量子产额(φEo)、光系统I(PS I)反应中心活性(ΔI/I0)和Rubisco活化酶(RCA)的活性及相对表达量均随着叶片的衰老逐渐下降,但与清水对照相比,MT处理下VJ和VI显著降低,Rc/Cm、ΔI/I0和RCA活性及m RNA丰度均显著增加,说明MT能够延缓衰老对PS I和PS II反应中心的伤害,提高功能叶片和衰老叶片的光合效率;进一步测定发现,MT处理可以显著提高黄瓜的生长量和产量。5.随着叶片叶龄的增加,叶片中过氧化氢(H2O2)和超氧阴离子(O2.-)含量逐渐增加,同时超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性及其m RNA相对表达量和还原型抗坏血酸(ASA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量、还原/氧化型抗坏血酸(ASA/DHA)、还原/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值亦显著增加,但与清水对照相比,MT处理下衰老叶片的抗氧化酶活性及氧化还原物质含量多显著高于CK,H2O2和O2.-含量显著低于CK。可见,MT上调了叶片的抗氧化能力,降低了叶片中活性氧(ROS)的积累,进而延缓了叶片衰老。此外,测定发现MT预处理还显著上调了衰老叶片中生长素(IAA)信号关键转录因子ARF1表达量,下调了脱落酸(ABA)信号关键转录因子ABI5表达量。
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