背景:SCD的研究是法医学最重要的任务之一,而EMI的死后诊断是法医病理学的重点和难点。不足6h的心肌梗死死亡病例,其心肌在肉眼和光学显微镜下无特异性的改变,不使用特殊方法,难以对EMI引起的猝死作出早期的组织学诊断。在常规的组织学染色出现特征性的形态学改变以前,缺血心肌已经发生了一系列的病理生理变化。生物化学,组织化学、酶组织化学、荧光组织化学染色,电子显微镜技术都能显示心肌的早期损害,但是上述方法或因为操作过于复杂,或因为缺乏特异性、稳定性,或因费用过高,以及易受到组织自溶、腐败等因素的影响而限制了它们在法医学中的应用。IHC作为一项快捷、简便、实用的方法,它可以显示缺血心肌细胞内蛋白质质和量的变化,从而为EMI死后诊断提供了一种可能。此前的研究表明,心肌细胞死亡的方式有坏死和调亡两种,cTnI和caspase-3免疫组织化学染色是检测心肌坏死和调亡可靠而敏感的指标,可望用于检测心肌缺血引起心肌细胞的调亡和坏死。用于心肌缺血引起猝死的死后诊断的IHC指标能否用于法医学实践,除了需要考虑其特异性和敏感性以外,还必须考虑组织自溶、腐败等因素对抗原的影响。目前,用于心肌缺血引起猝死的死后诊断的各种IHC指标的死后稳定性及其在死后不同时间的表达变化规律是值得进一步研究的重点。目的本研究利用结扎左侧冠状动脉前降支的方法建立家兔心肌缺血模型,检测cTnI和caspase-3两项指标在死后不同时间的表达情况,旨在探讨它们在家兔死后的稳定性及其表达规律,以期对其在法医学中诊断SCD的应用价值进行评价。方法选用健康新西兰大白兔15只,雌雄不限,体重2000-2500g,随机分为实验组(B组n=10)和对照组(A组n=5)。实验组于左心耳下2㎜处结扎左冠状动脉,建立家兔急性心肌缺血模型并在冠状动脉前降支结扎后3h处死家兔,取缺血区心肌;对照组不结扎冠状动脉直接处死,取左心室心肌。两组标本在4℃放置,分别于死后1h、2h、4h、8h、16h、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、10d、14d、21d取材作HE染色和cTnI和caspase-3免疫组化染色。然后观察两组标本的HE切片;并按IHC染色结果判定标准对IHC染色进行全面的观察、判断,采用图像分析技术,客观测量IHC切片中两种指标的阳性表达面积和强度。结果1 HE染色:正常心肌4℃放置2d以内,细胞结构清楚,横纹清晰,未见明显异常改变。3-7d,细胞结构稍模糊,开始出现肿胀等。7d后细胞结构进一步模糊,细胞核溶解消失。缺血区心肌见细胞肿胀、水样变性,横纹模糊或消失,胞浆灶性嗜伊红性增强、胞核缩小而染色加深,肌纤维波浪样变等心肌缺血的病理改变。4℃放置7天以内,心肌细胞水样变性,横纹模糊或消失及胞浆灶性嗜伊红性增强、胞核缩小而染色加深。4℃放置7-21天,两组的改变相似,但缺血心肌仍可见肌纤维波浪样变。2免疫组化染色:2.1 cTnI的表达:正常心肌组织cTnI在心肌细胞胞浆内呈强阳性表达,染色均匀,未见明显缺失区,间质内无表达。缺血区心肌组织均可见不规则点、灶、片状cTnI缺失区;部分区域心肌细胞cTnI阳性表达强度减弱。连续HE染色对比发现cTnI缺失及阳性表达减弱区心肌细胞胞浆嗜伊红性增强、细胞核缩小而染色加深。图像分析结果:随放置时间延长cTnI阳性强度有减弱、阳性反应面积有减少趋势。在4℃放置5d以内(包括5d)两组标本染色阳性强度变化不明显(P>0.05),7d(包括7d)以内,两组标本之间cTnI阳性强度差异明显(P<0.01)。6d(包括6 d)以内两组标本之间cTnI阳性反应面积变化不大(P>0.05),7d(包括7d)以内,两组标本之间cTnI阳性反应面积有显著性差异(P<0.01)。10以后,两组标本之间的阳性反应强度和面积的差异不明显(P>0.05)。2.2 caspase-3的表达:心肌细胞在正常情况下caspase-3呈弱阳性或阴性表达,且阳性反应面积小。缺血心肌caspase-3在心肌细胞胞浆内呈灶状、片状强阳性表达。图像分析结果显示随着放置时间的延长caspase-3阳性强度和阳性反应面积有减少趋势。两组标本在4℃放置3d以内,caspase-3阳性强度和面积变化均不大(P>0.05),在4℃放置5d以内,两组标本之间caspase-3阳性强度差异有显著性(P<0.01);5d(包括5d)以内,两组标本之间caspase-3阳性面积差异有显著性(P<0.01)。6d以后,两组标本的阳性反应强度和面积差异不明显(P>0.05)。结论cTnI和caspase-3稳定性好。死后4℃放置7天以内,缺血心肌和正常心肌cTnI表达差异有显著性。死后4℃放置5天以内,缺血心肌和正常心肌caspase-3表达差异有显著性。因而,cTnI免疫组化染色可用于死后4℃放置7天以内的尸体,caspase-3免疫组化染色达可用于死后5天以内的尸体。