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背景:肺癌是当今社会上对人类健康威胁最大的恶性肿瘤,肺癌的发病率高,发现时间晚,预后较差,是导致男性女性癌症死亡的最主要的原因。目前肺癌的治疗方法主要是化疗、放疗和手术治疗,尽管治疗方法在不断的改善,但是患者的预后依然不乐观,传统的治疗方式也存在很多问题,新的治疗方法有待进一步研究。近些年来免疫治疗的迅速发展为肺癌患者的治疗提供了新思路,并成为手术,放化疗后的重要治疗手段,给癌症治疗带来了新的希望。新生血管的生成是肿瘤的重要的生物学特点,抑制新生血管的生成是抗肿瘤治疗的重要研究方向。1971年Folkman提出了肿瘤的生长依赖新生血管的生成的假说,肿瘤不受控制的生长、免疫逃避和治疗抵抗都是由失调的新生血管增生造成的。1997年O’ Reilly等人从小鼠内皮细胞瘤细胞系培养液中发现了内皮抑素,实验证实内皮抑素可以减少内皮细胞的增殖和转移,阻止新生血管的生成从而抑制肿瘤生长。内皮抑素被认为是一种安全的无毒副作用,不会产生耐药性具有广阔应用前景的药物。但是研究显示单独应用血管内皮抑素的效果并不理想,与其他药物合用的治疗方式需要去探索。程序性死亡受体-1(PD-1)主要表达在活化的B细胞、T细胞、巨噬细胞,树突状细胞和单核细胞,PD-L1和PD-L2为其两个配体,在肿瘤中经常过度表达,当两者结合时可以抑制机体对肿瘤的免疫反应。美国食品与药品管理局已于2016年批准PD-1单克隆抗体用于医治肺癌。有研究报道内皮抑素不仅可以抑制新生血管的形成同时可以使异常增殖紊乱的血管正常化,PD-1单克隆抗体联合血管内皮抑素的联合应用是否具有协同作用,目前国内外的研究鲜有报道。目的:本实验以lewis肺癌小鼠作为模型,探究PD-1单克隆抗体联合血管内皮抑素抑制肿瘤生长的效应。方法:1.构建lewis肺癌C57BL/6鼠移植瘤模型,模型构建成功后将小鼠随机分为四组:A组(PBS对照组)、B组(PD-1单克隆抗体组)、C组(血管内皮抑素组)及D组(PD-1单克隆抗体联合血管内皮抑素组);每组有C57BL/6小鼠6只,小鼠皮下接种肿瘤细胞7天后开始给药进行治疗干预,治疗14天,最后一次给药后次日处死小鼠;每2天测量一次小鼠的肿瘤体积,察看肿瘤的生长状况,并绘制肿瘤生长曲线。2.A组(PBS对照组)每天经尾静脉注射0.2mIPBS,持续给药14天;B组(血管内皮抑素组)每次经尾静脉注射15mg/(kg.d)血管内皮抑素,持续给药14天;C组(PD-1组)分别于第1,4,7,10天经腹腔注射给药100ug的PD-1单克隆抗体,共给药四次;D组(PD-1联合血管内皮抑素组)每天经尾静脉注射15mg/(kg.d)血管内皮抑素,连续给药14天,分别于第1,4,7,10天经腹腔注射给药100ug的PD-1单克隆抗体,共给药四次。3.药物治疗干预结束后的小鼠用采用眶静脉采血法采集小鼠的静脉血,并用EDTA抗凝。置于离心机上分离取上清,用酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒检测血浆中IL-17的表达。4.小鼠肿瘤组织的分离,察看肿瘤组织的生长状况,用4%多聚甲醛溶液固定取出的小鼠肿瘤组织,制作成石蜡组织块,切片,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中的VEGF,CD31的表达。结果:与A组相比,B组(P<0.001)、D组(P<0.001)肿瘤生长受到明显抑制,C组(P=0.084)肿瘤虽有缩小但不具有统计学差异;和A组相比,B、C、D组血浆中INFγ的浓度均有明显升高(P<0.001),其中D组升高最为明显;和A组相比,D组(P<0.001)小鼠肿瘤组织中VEGF的阳性表达显著最低;MVD计数D组和A组相比显著降低(P<0.001),D组和B组相比(P=0.019),D组和C组相比(P<0.001)。结论:PD-1单克隆抗体联合血管内皮抑素治疗明显减缓肿瘤生长速度,有效改善肿瘤微环境,具有明显协同抗肿瘤作用。