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背景与目的牙周炎是侵犯牙龈和牙周组织的慢性感染性疾病,是导致我国成人失牙的主要原因之一。大量研究表明牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)是慢性牙周炎病变区最主要的优势菌,具有显著的毒力或致病性,能通过多种机制干扰宿主防御功能,引发牙周的破坏,且与牙周炎治疗后复发或病情加重有关。对该菌致病性的研究发现,它们具有一系列逃避宿主防御机制及破坏宿主组织的毒性因子,如:菌毛、外膜蛋白、细胞外囊泡、脂多糖和凝集素等。菌毛作为P.gingivalis表面结构之一,介导了该菌与宿主组织之间相互作用,促进细菌对靶位点的粘附和定植,并通过在病变部位抑制细胞外基质蛋白-粘附素受体来阻断上皮细胞和宿主免疫细胞之间的信息传导,从而抑制宿主的防御机制。另外,菌毛素多肽也可激活多形核白细胞(PMN),促进纤维蛋白原-PMN相互作用,使炎症前物质IL-8增加,IL-8为选择性诱导中性粒细胞和单核细胞趋化因子,而大量中性白细胞和单核细胞的聚集加重局部的炎症反应。FimA是特异的P.gingivalis菌毛亚单位蛋白基因,存在于P.gingivalis基因组DNA中,菌毛FimA基因编码的蛋白包括菌毛蛋白,粘附素蛋白和参与将亚单位菌毛素蛋白穿过细胞膜的转移蛋白。不同菌株产生的P.gingivalis菌毛FimA蛋白存在差异。本研究以河南慢性牙周炎患者作为研究对象,对患者龈下菌斑中P.gingivalis的感染情况及其FimA毒力基因型的分布与牙周炎发病的相关性进行研究,从基因水平探讨和分析P.gingivalis感染与牙周病发生的关系。方法参照Armitage牙周炎诊断标准,随机抽样选取2005年7月至2006年3月在河南省人民医院口腔科就诊的慢性牙周炎患者,共计52例作为研究对象。其中男性34例,年龄24~69岁,平均43.8岁。女性18例,年龄26~62岁,平均40.2岁。要求所有纳入研究的对象符合全身状况良好,无系统性疾病、遗传病史,近半年未接受牙周治疗,近三个月未服用任何抗菌药物。首先对52例研究病例进行临床观察指标的检查和记录;然后,收集52例慢性牙周炎患者的104个位点的龈下菌斑,采用UNIQ-100柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒法和Chelex-100法两种方法提取牙菌斑中细菌的DNA;采用16SrRNA PCR法检测P.gingivalis,并根据菌毛FimA毒力基因型的特异引物,用聚合酶链反应(PCR)检测FimAⅡ型和FimAⅣ型菌株的分布。结果牙龈卟啉单胞菌在52例慢性牙周炎患者龈下菌斑中检出40例,检出率为76.9%,在牙周袋深度(PPD)4~6mm位点龈下菌斑标本的P.gingivalis的检出率(57.6%)低于PPD>6mm采样的位点(78.9%),两组差异有统计学意义(P<0.05),表明慢性牙周炎患者龈下P.gingivalis感染率很高,支持该细菌在慢性牙周炎发病过程中具有重要作用,并且牙周袋深度(PPD)与P.gingivalis检出之间存在相关性。因此,选择中度或重度牙周袋最深处标本可获得较高的P.gingivalis阳性检出率。P.gingivalis毒力基因型FimAⅡ型和FimAⅣ型在40例慢性牙周炎P.gingivalis感染患者中,FimAⅡ型检出15例(37.5%),FimAⅣ型检出9例(22.5%),表明P.gingivalis FimA毒力基因型存在着基因多态性。试剂盒法和Chelex-100法提取细菌基因组DNA用于P.gingivalis的鉴定,两者之间没有显著性差异(P>0.05),但后者操作更简单、快速、成本低,适于在普查时使用。结论1.慢性牙周炎患者龈下菌斑中,牙龈卟啉单胞菌的检出率76.9%,表明慢性牙周炎患者龈下P.gingivalis具有较高的感染率。牙周袋深度(PPD)与P.gingivalis检出之间存在相关性,选择中度或重度牙周袋最深处标本可获得较高的P.gingivalis阳性检出率。2.牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA毒力基因型存在着基因多态性。3.试剂盒法和Chelex-100法提取细菌基因组DNA用于牙龈卟啉单胞菌的鉴定,两者之间没有显著性差异,后者操作更简单、快速、成本低,适于在普查时使用。