γC家族细胞因子（IL-2,IL-4,IL-7,IL-9,IL-15以及IL-21）具有多效免疫调节作用,主要通过JAK-STAT信号通路实现生物学功能,但这一过程分子机理仍不清楚。γC作为γc家族细胞因子共有受体,是该家族成员信号转导中必要的元件,但目前还未发现任何转录因子能够控制γC在T细胞中的表达,因此推测有其他因素影响γc的信号进而调控其功能。近年来,陆续报道了某些免疫因子受体能与质膜结合而影响其信号转导过程,γC的胞内域存在可能与质膜相互作用的氨基酸序列。此外,受体通过与细胞内信号蛋白相互作用来传递信号,目前却只鉴定出极少数能与γC受体胞内域相互作用的蛋白。基于此,我们在细胞生理环境下,通过γC与周围环境相互作用来研究γC的信号转导过程,本论文主要的工作内容如下:1.荧光共振能量转移技术（FRET）研究γC胞内域与质膜间相互作用。FRET是基于供体与受体间的距离来检测两者的相互作用,在一定范围内距离越近则FRET效率越高。运用FRET在活细胞中检测γC胞内域与质膜是否有相互作用,以TFP为供体（目标蛋白与TFP融合表达）,R18为受体（R18标记细胞膜）。受体漂白法分别检测到γ315-TFP与3aa-TFP（阳性对照）的FRET效率接近并明显高于32aa-TFP（阴性对照）,因此证明在细胞生理环境下γC胞内域能与质膜相互作用。此结果与前期课题组体外应用分子动力学模拟、圆二色谱、固有荧光以及液体核磁等方法对γc胞内域与质膜作用的研究结果一致。2.邻近生物素识别技术（BioID）鉴定与γC互作蛋白。BioID是一种邻近蛋白标记方法,利用生物素连接酶催化的蛋白修饰将γC附近10 nm范围内的蛋白生物素化,该方法能在细胞生理条件下鉴定出与γC有微弱或短暂相互作用的蛋白。我们运用免疫荧光检测到融合蛋白BirA*-myc与γ-BirA*-myc在HEK293T细胞内中表达,加入生物素后,免疫荧光与免疫印迹均检测到生物素化蛋白,最后质谱鉴定生物素化蛋白。我们质谱结果初步分析出之前未被鉴定与γC相互作用的蛋白,但需对质谱数据进一步分析检验其可靠性,还应结合其它蛋白互作的方法进一步验证。本论文在HEK293T细胞体系中初步鉴定了与γc互作的蛋白,建立了研究膜蛋白互作简单而又快速的方法。