抗生素在抗细菌感染的过程中发挥着里程碑式的作用。但抗生素的滥用和乱用严重引起细菌耐药问题。因此需要寻找新途径和新靶点,群感效应抑制剂(quorum sensing inhibitor QSI)是通过阻断信号分子传递信息,调控靶基因从而影响毒力因子等次级代谢物。铜绿假单胞菌(Psendomonas)感染性强,严重威胁着人类健康,其群感效应系统(quorum sensing QS)调控毒力因子和生物膜的形成。本文通过具有革兰氏阴性菌QS系统的报告菌株,从部分清热解毒类中药中筛选出具有群感效应抑制作用的成分,并研究对铜绿假单胞菌QS的作用及机理。将备选药物经QS报告菌株紫色杆菌CV026和根癌农杆菌A136筛选,运用报告平板法对比抑菌圈与抑色素圈进行初筛。通过MIC法检测各药物对两种报告菌株的最低抑菌浓度,选择药物MIC下浓度梯度进行报告平板法复筛,初步确定车前草具有抑制群感效应的作用,有效浓度范围为MIC~1/4MIC(63ug/mL~16ug/mL)。由于车前草粗体物中含有大量鞣酸和酯类等物质。经过分离提取与硅胶柱纯化,将各组分经CV026的报告平板法筛选,确定车前草乙酸乙酯部位的PE12为潜在的QSI成分。首先通过MIC实验确定PE12对铜绿假单胞菌PA01的最低抑菌浓度,并选择MIC、1/2MIC、1/4MIC浓度(16ug/mL,8ug/mL,4ug/mL)作为实验组。用MTT法检测药物组和对照组对PA01生长曲线的影响,再作用于QS相关毒力因子绿脓菌素、藻酸盐、鼠李糖、蛋白水解酶和氧化应激能力。结果显示MTT实验中16ug/mL显著抑制PA01生长和毒力因子,8ug/ml,4ug/ml无抑菌作用。绿脓菌素第1,5,7天的产量8ug/ml药物组较对照组分别抑制了8.33%,3.10%,11.01%,7.14%,p<0.05,作用与16ug/ml药物组相同,p>0.05;藻酸盐1,3,5,7天的产量,8ug/ml药物组较对照组分别抑制了92.15%,89.41%,70.28%,46.73%,p<0.01,与16ug/ml作用相近,p>0.05;鼠李糖含量分别在24h和72h检测,8ug/ml药物组较对照组分别抑制了60.96%,43.66%,p<0.01,作用低于16ug/ml药物组,p<0.05;外毒素a于5.5h和24h检测,8ug/ml药物组较对照组抑制了39.58%,60.09%,p<0.01,与16ug/ml药物组作用接近,p>0.05。但对蛋白水解酶的作用均较微弱,仅第一天作用明显,p<0.01。在4ug/ml药物浓度时,抑制作用明显减弱,仅对鼠李糖,和绿脓菌素有部分作用。考察pe12三个浓度对生物膜形成期7天的作用,通过半定量法、银染法、扫描电镜法考察。结果显示16ug/ml具有抑制菌量及生物膜的形成,8ug/ml能够抑制生物膜。生物膜半定量结果显示16ug/ml与8ug/ml对生物膜有抑制作用,对比对照组1,3,5,7天分别抑制了37.32%,51.89%,67.60%,35.38%,p<0.01,其中16ug/ml比8ug/ml药物组,p<0.01。4ug/ml只有第3、5天有微小的作用。对照组和8ug/ml药物组在96h的半定量实验中可见,8ug/ml药物浓度下对生物膜形成42h后的抑制作用显著增强,对照组为(1.95±0.06)而8ug/ml药物组下降至(1.22±0.1),p<0.01。显微镜和电镜下可见菌体散在分布,成团少,黏性物质较稀薄。1/4mic(4ug/ml)和对照组,菌体大量聚集,周围清晰可见黏性物质生物膜。选择mic和1/2mic的pe12药液为实验组培养菌液后,提取总rna,逆转录,通过实时荧光定量pcr监测相关基因lasr、lasi和rhlr的变化。结果显示8ug/ml对信号分子合成酶基因lasi有显著抑制作用,8ug/ml药物组较对照组抑制了38.02%,p<0.01,对lasr基因有抑制作用,8ug/ml药物组较对照组抑制了47.93%,p<0.01,对rhlr基因有抑制作用,8ug/ml药物组较对照组抑制了25.76%,p<0.01,8ug/ml与16ug/ml药物组相比作用相同,p<0.01。本研究建立了完整的qs报告菌株筛选qsi的方法,得到车前草pe12具有较好的群感效应抑制作用,在8ug/ml浓度下能够抑制铜绿假单胞菌qs相关毒力因子与生物膜的产生,并对qs系统的lasi基因有显著抑制作用。本研究的运用前景广泛,理论新颖,为细菌耐药性问题探索新靶点和新的qsi有效药物铺垫了系统的思想和途径。