论文部分内容阅读
目的:以紫花地丁正丁醇部位为研究对象,对其抗乙型肝炎病毒活性以及其免疫肝损伤保护作用进行考察和研究,并对紫花地丁正丁醇部位的成分进行分析。方法:1.紫花地丁药材采用性状鉴定、显微鉴定、理化鉴别及荧光鉴定进行生药学研究,采用正交试验设计L9(34)法对紫花地丁醇提液进行工艺提取优化,并应用溶剂提取法制备紫花地丁正丁醇部位。2.采用体外抗乙型肝炎病毒实验,以Hep G 2.2.15细胞为实验对象,通过MTT法测定正丁醇部位对Hep G 2.2.15细胞的毒性作用,ELISA法测定正丁醇部位影响细胞上清液中HBe Ag和HBs Ag的分泌,荧光定量PC R法测细胞上清液中HBV DNA拷贝数。3.通过建立Con-A诱导的免疫肝损伤模型,以不同剂量紫花地丁正丁醇部位溶液饲喂小鼠,测血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶的水平,肝组织进行病理学检查,HE染色后,观察肝脏组织结构变化。并检测肝组织中SOD和GSH-PX活力以及MDA、TNF-α和IFN-γ含量的变化。4.采用硅胶柱层析,重结晶等方法分离出紫花地丁正丁醇部位的化学成分,经核磁共振氢谱、碳谱等鉴定其结构。结果:1.紫花地丁药材性状鉴定、显微鉴定均符合2015版药典描述,含有黄酮类、香豆素类、多糖及鞣质等成分,紫花地丁提取工艺最优条件是乙醇浓度60%、料液比1:20,提取时间40分钟。2.体外细胞实验结果表明紫花地丁正丁醇部位对细胞无毒性,能抑制Hep G 2.2.15细胞中HBsAg和HBe Ag的分泌以及HBV DNA的拷贝,均于1 mg/ml剂量细胞培养6天后抑制率最高,抑制率分别为26.01%,26.58%,65.89%。3.动物实验结果发现紫花地丁正丁醇部位能有效降低血清中的ALT、AST水平以及肝组织匀浆中的MDA含量,且明显提高肝组织中的SOD、GSH-PX活性以及TNF-α和IFN-γ的含量。紫花地丁正丁醇剂量组(12.00 g/kg)对ALT、AST水平的影响最佳(P<0.01),紫花地丁正丁醇剂量组(6.00 g/kg)对SOD、GSH-PX、MDA、TNF-α和IFN-γ的影响最佳(P<0.001),观察肝组织病理切片,与模型组相比紫花地丁正丁醇组肝组织病变较轻。4.从紫花地丁正丁醇部位分离出了5个化合物,分别为秦皮乙素,早开堇菜苷,槲皮素-3-O-鼠李糖苷,菊苣苷,秦皮甲素。结论:紫花地丁的生药学研究为紫花地丁的鉴定及提取提供了基础,紫花地丁正丁醇部位有良好的抗HBV病毒作用及免疫肝损伤保护作用,其可能机理与体内的免疫应答和氧化应激有关。紫花地丁正丁醇部位成分研究中,分离出了秦皮乙素、早开堇菜苷、菊苣苷、秦皮甲素4个香豆素成分,槲皮素-3-O-鼠李糖苷1个黄酮类成分。