胃癌相关基因高效筛选及其快速检测的方法建立

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背景:胃癌是源自胃粘膜上皮细胞的恶性肿瘤,占胃恶性肿瘤的95%,每年新发生占所有新发癌症病例的9%。中国,日本,越南等东亚国家由于受传统饮食习惯,气候地理等影响胃癌致死率居世界前列,西方国家近年胃癌的发病率和死亡率也曾上升势头。胃癌在我国发病率很高,死亡率占恶性肿瘤第一位,全国胃癌平均死亡率高达20/10万。胃癌的高转移高侵袭性是致使其患者死亡的主要原因,因此早期检测胃癌转移相关基因对预防其发生发展,预后及治疗具有重要作用,是现阶段胃癌基础研究的热点之一。目的:筛选高侵袭型胃癌转移相关基因,探讨其在胃癌发生发展中可能通路的分子水平机制。建立逆转录环介导的等温扩增快速检测高侵袭型胃癌转移相关基因。方法:分别以年龄相近、性别相同的3例肝转移胃癌病人标本的转移灶和原发灶为实验组和对照组做高通量cDNA表达谱芯片,初选3张芯片共同上、下调基因;利用pathway V1.0分析软件寻找初筛基因中存在多种可能影响胃癌发生发展及其转归的分子通路;通过RT-PCR测定数例转移胃癌病例原发和转移灶中相关基因的mRNA转录水平。快速抽提肝转移胃癌病人标本的RNA用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增转移相关基因Serpine1,扩增条件为63℃保温30分钟,扩增后产物通过特异性内切酶进行鉴定。结果:通路分析筛选出来的上调基因CLDN1和下调基因UGT1A10在6组病例中经RT-PCR定性检测全部与分析结果相符。RT-LAMP能特异性快速的扩增目的基因。结论:pathway通路分析能在芯片初选相关基因的基础上发现与疾病相关的分子机制通路及相关基因,为研究胃癌转移基因提供依据和参考。RT-LAMP能因其特异,快速,高效的优点可以广泛运用于肿瘤转移相关基因的检测,对临床早期诊断提供标准。
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