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目的研究靶向COX-2shRNA对大鼠HSC-T6COX-2的抑制作用,观察Atf3、Serpinb2、Pgk1、Thra基因表达的影响,进一步探讨COX-2shRNA抑制HSC增殖的作用机制。方法实验将HSC-T6分为三组,空白对照组(以PBS液替代质粒),空载体组(未插入目的基因的DNA片段,HK质粒组)及转染组(pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA1组),利用LipofectamineTM2000将质粒转染入大鼠肝星状细胞,在荧光显微镜下观察其转染效率,然后提取转染后24h,48h,72h各组细胞中RNA,应用RT-PCR技术检测各组各时间段COX-2、Atf3、Serpinb2、Pgk1、Thra基因表达情况。结果1、荧光显微镜下观察结果:COX-2shRNA1转染大鼠肝星状细胞后24h、48h、72h,荧光显微镜下观察,转染成功的细胞质中可见绿色的荧光,转染效率均可达70%以上,空白组与空载体组细胞质中未见绿色荧光。2、转染后COX-2表达的影响:应用RT-PCR方法检测转染后24h、48h、72h转染组COX-2mRNA的表达都低于空白对照组和空载体组(P<0.05),其中以72h抑制最为明显,空白对照组和空载体组无沉默效应。3、转染后Atf3、Serpinb2、Thra表达的影响:应用RT-PCR方法检测转染后24h、48h、72h转染组Atf3、Serpinb2mRNA的表达都低于空白对照组和空载体组(P<0.05),其中以72h抑制最为明显,空白对照组和空载体组无沉默效应。4、转染后Pgk1表达的影响:应用RT-PCR方法检测转染后24h转染组Pgk1mRNA的表达与空白对照组和空载体组之间无差异(P﹥0.05),48h、72h低于空白对照组和空载体组(P<0.05),以72h抑制最为明显,空白对照组和空载体组无沉默效应。结论1.靶向COX-2shRNA转染入大鼠HSC-T6可沉默HSC中COX-2的表达。2.靶向COX-2shRNA可以下调HSC增殖相关基因Serpinb2的表达。3.靶向COX-2shRNA可以下调HSC脂肪代谢相关基因Pgk1、Thra的表达。4.靶向COX-2shRNA抑制HSC增殖可能通过调节Serpinb2、Pgk1、Thra等基因的表达起作用。