杜仲叶为杜仲科杜仲属植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的成熟叶片,被收录于2005年版《中国药典》中,味微辛、性温,归肝、肾经,具有补肝肾、强筋骨、补中益气、强志的功效,主要用于治疗腰膝酸软、肝肾不足、筋骨痿弱等症。杜仲叶主要成分包括:环烯醚萜类、黄酮类和木脂素类。现代药理学研究表明,杜仲叶具有降压、调节血糖、降脂、抗炎、抗病毒、抗疲劳、增强免疫等作用。杜仲叶资源丰富,具有较高的经济价值。因此针对杜仲叶这一植物资源开展全面的开发研究具有重要意义。本文以杜仲叶为研究对象,通过对杜仲叶的高效提取和活性成分的分离纯化研究,建立了可扩大化生产的方法,为杜仲资源的深入开发提供了物质基础。1.建立了高效液相色谱(HPLC)同时检测杜仲叶中京尼平苷酸、绿原酸、槲皮素-3-O-桑布双糖苷、芦丁及异槲皮苷的分析方法:色谱柱:Diamonsil C18(5μm,250 mm× 4.6 mm i.d.),流动相:0.2%甲酸水溶液(A)-乙腈(B);梯度洗脱条件:0-1 min,5-7%B;1-8 min,7-7%B;8-10 min,7-10%B;10-18min,10-10%B;18-45 min,10-30%B;进样量:5 μL,柱温:30℃,流速:1 mL/min;检测波长:238nm,254nm,330nm。结果表明,五种目标化合物在3.91-1000 μg/mL检测范围内展现良好的线性相关,重复性、精密度及稳定性良好,加样回收率结果准确。2.确定了新型三元低共熔溶剂联合微波辅助提取杜仲叶中的目标化合物工艺参数的优化,最佳的提取工艺为:微波提取功率为500 W,提取温度为54℃,提取时间为20 min,液固比为19mL/g。其中新型低共熔溶剂组成为:氯化胆碱:1,4-丁二醇:L-抗坏血酸=1:1:0.2(摩尔比),含水量20%。在此最优条件下重复实验,五种目标成分的含量约为传统有机溶剂提取方法的1.23倍,且该提取过程绿色高效节能。3.确定了大孔吸附树脂富集杜仲叶中五种目标成分的最佳工艺参数:选择AB-8大孔树脂;除杂洗脱剂浓度为40%乙醇;洗脱剂浓度为60%乙醇;上样体积为50 mL;洗脱剂总体积为6 BV。在此条件下,可以利用大孔吸附树脂实现低共熔溶剂的回收再利用,杜仲叶中五种目标化合物的含量比未经处理的粗提液含量高出约4.7倍。该过程吸附性能优异,且解吸率高,实现了对杜仲叶中目标化合物富集的目的。4.建立了制备色谱分离纯化杜仲叶中五种目标成分的工艺:采用两次分离方法,第一步分离选择Hedera ODS-2(250 mm ×20.0 mm,10 μm)制备柱;甲醇-水作为洗脱溶剂;洗脱程序为:0-80 min,7-100%甲醇;洗脱流速:8 mL/min;检测波长为210nm,254nm。第二步分离选择Thermo Fisher(250 mm ×21.2 mm,5μm)制备柱;甲醇-水=45/55(v/v)作为洗脱溶剂;采用等度洗脱;洗脱流速为5 mL/min;检测波长为210 nm,254 nm。在此优化条件下,共得到5种化合物,即京尼平苷酸、绿原酸、槲皮素-3-O-桑布双糖苷、芦丁和异槲皮苷,5种化合物的回收率均大于85%,纯度均在94%以上。本论文成功地开发了一种新型天然三元低共熔溶剂,并首次联合微波辅助技术对杜仲叶叶中的主要活性成分进行高效提取,同时采用大孔吸附树脂技术实现了对溶剂的回收再利用及活性物质的富集分离,并结合制备色谱分离技术对五种目标成分进行了选择性分离纯化。本研究为杜仲资源的合理应用提供了理论支撑,也为其他药用植物成分的高效提取与分离纯化提供了技术路线参考。