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目的:我国传统中药冰片一直被用作辅助用药,能促进机体对其他有效药物的摄取,但机制不明确。我们前期研究发现氯通道开放可以促进细胞对药物的摄取,使用氯通道阻断剂及下调氯通道蛋白表达可以抑制该作用,说明氯通道可能参与或调节细胞对药物的摄取。本课题以低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)为研究对象,以氯通道为研究出发点,探讨:1)氯通道在冰片促进阿霉素跨细胞膜转运中的作用。2)参与冰片促进阿霉素跨细胞膜转运的氯通道分子本质。方法:本研究中使用的是天然冰片。1)用荧光示踪法检测冰片促进阿霉素跨细胞膜转运情况;2)采用全细胞膜片钳技术记录冰片激活的全细胞氯电流,并分析其电流特性及容积敏感性;3)用倒置荧光显微镜拍摄细胞图像,使用Q500MC图像分析软件计算并测量细胞容积变化;4)用酶标仪法及流式细胞术,检测冰片作用细胞前后细胞内药物浓度的变化及与氯通道关系;5)使用si RNA技术下调鼻咽癌细胞Cl C-3氯通道蛋白的表达,用Western Blot检测干扰前后细胞Cl C-3蛋白的表达水平;用流式细胞术及荧光显微示踪法检测si RNA对冰片促进阿霉素跨细胞膜转运的影响;6)用MTT法检测冰片及冰片联合阿霉素的细胞毒作用。结果:1)冰片明显促进CNE-2Z细胞对阿霉素的摄取(增加约29%)。2)冰片能快速激活CNE-2Z细胞氯通道,产生氯电流,该电流能被氯通道阻断剂DIDS及Tamoxifen抑制。此电流也可以被47%高渗溶液抑制,说明冰片激活的氯电流具有容积敏感性。离子置换实验的结果表明,该氯通道的离子选择性为:I->Br->Cl->Gluconate-。3)细胞外灌流冰片溶液30分钟,CNE-2Z细胞体积明显缩小(减小约9%)。冰片此作用可被氯通道阻断剂DIDS阻断。4)冰片促进细胞对阿霉素摄取的效应可被氯通道阻断剂DIDS明显抑制。5)Cl C-3si RNA能显著下调CNE-2Z细胞Cl C-3氯通道蛋白表达(下调约57%);下调Cl C-3氯通道蛋白表达后,冰片促进CNE-2Z细胞对阿霉素摄取的作用减弱。6)冰片无明显的细胞毒作用,但可增强阿霉素对CNE-2Z细胞增殖的抑制作用,使其半抑制浓度(IC50)降低约50%。结论:1)冰片可以激活低分化鼻咽癌细胞的氯通道,促进细胞摄取阿霉素。2)氯通道是冰片促进阿霉素跨细胞膜转运的作用靶点之一。3)Cl C-3氯通道在冰片促进阿霉素跨细胞膜转运中起重要作用。4)冰片能明显加强阿霉素的抗肿瘤作用。