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目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)调控肿瘤增殖相关蛋白周期蛋白依赖性激酶4(Cyclin-dependent kinase 4,CDK4)和周期蛋白依赖性激酶6(Cyclin-dependent kinase 6,CDK6)对乙肝相关性肝癌细胞增殖能力的影响。方法1、采用Western blot法检测36例乙肝相关性肝癌患者组织及相应癌旁组织中TLR4、CDK4和CDK6的蛋白表达水平,并分析癌组织中TLR4与CDK4、CDK6之间的关联性。2、构建3个特定干扰TLR4的siRNA序列和一个阴性对照序列,通过脂质体转染肝癌细胞Hep-3B;通过Western blot法检测转染前后肝癌细胞中TLR4蛋白表达变化,筛选出最佳干扰序列。3、将实验分为siRNA(-)组、TLR4-siRNA组和Control组(正常Hep-3B细胞)。通过Western blot法检测转染前后肝癌细胞中TLR4、CDK4和CDK6的蛋白表达水平;采用MTT比色法、平板克隆形成实验检测干扰TLR4表达后肝癌细胞增殖能力。结果1、在乙肝相关性肝癌患者组织中,TLR4、CDK4和CDK6蛋白的总体表达水平高于相应癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。且在肝癌组织中TLR4与CDK4的表达呈正相关性(r=0.66,P<0.05);同样,TLR4与CDK6的表达也呈正相关性(r=0.57,P<0.05)。2、与其他干扰序列或正常细胞相比,TLR4-siRNA-03干扰序列干扰TLR4表达的效果最佳(P<0.05)。3、下调肝癌细胞Hep-3B中TLR4的表达后,与Control组相比,TLR4-siRNA组中CDK4、CDK6蛋白表达均随之降低(P<0.05),肝癌细胞Hep-3B的增殖能力也明显下降(P<0.05),TLR4-siRNA组克隆形成率为(18.77±4.61)%也明显下降(P<0.05);然而,Control组和siRNA(-)组之间却无统计学意义(P>0.05)。结论1、TLR4和CDK4、CDK6在乙肝相关性肝癌患者组织中的总体表达水平高于相应癌旁组织,且在癌组织中TLR4与CDK4、CDK6均存在正相关性;2、在乙肝相关性肝癌细胞中TLR4可能通过调控肿瘤增殖相关蛋白CDK4、CDK6来影响其增殖。