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目的:原发性肝癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，世界范围内发病率高居前五位，且死亡率极高，占肿瘤死亡率第三位，虽然近些年在肝癌的诊断治疗方面取得了很优异的发展，但现有的各种治疗手段均无法达到彻底根治的目的。 氩氦冷冻消融技术是20世纪末兴起的一种微创超低温冷冻消融的先进技术，可通过低温杀伤肿瘤，却不会引起射频消融、微波消融等热消融技术所无法避免的“煮沸效应”，但治疗巨大肝癌时仍无法避免严重肝损伤、术后出血以及远期复发转移等并发症。三氧化二砷(As2O3)是20世纪70年代我国对肿瘤化疗所首创的新型治疗手段，首先被哈尔滨医科大学张亭栋教授等用于急性早幼粒细胞性白血病的治疗，后被发现其对实体肿瘤也具有很好的治疗效果，随着As2O3抗肿瘤机制的明确，其临床应用也越来越广泛。2004年11月国家食品药品监督管理局批准将三氧化二砷(As2O3)作为晚期肝癌化疗药物，但Ⅱ期临床试验表明，单独应用As2O3的抗肿瘤效果并不令人满意。 本实验旨在探索氩氦冷冻消融技术联合三氧化二砷（As2O3）提升肝癌治疗效果的可行性，以期减少肝癌行氩氦刀冷冻消融术后复发的可能，并提升三氧化二砷(As2O3)对肝癌的治疗效果。 方法:1、本实验分为四组，即空白对照组、As2O3治疗组、冷消融治疗组、联合治疗组。空白对照组无干预处理措施;As2O3治疗组分3个亚组，分别给予不同浓度As2O3（2μmol/ml、5μmol/ml、10μmol/ml）;冷消融治疗组分3个亚组，分别给予不同低温消融处理(-30℃、-40℃、-60℃);联合治疗组分9个亚组（即低温-30℃、-40℃、-60℃三个标准与As2O3三个浓度2μmol/ml、5μmol/ml、10μmol/ml两两组合）;2、培养鼠源性肝癌细胞株H22，并接种于昆明小鼠腹腔中，建立腹水型荷瘤鼠模型;3、氩氦超冷刀分别处理体外培养及昆明小鼠腹水提取的H22细胞;4、台盼蓝染色法检测37℃、-30℃、-40℃、-60℃冷冻消融处理后的细胞存活率;5、CCK8法对各组进行细胞增殖-毒性检测，并计算细胞抑制率;6、流式细胞仪(FCM)分析检测各组的细胞凋亡情况;7、透射电镜观察不同温度冷冻消融后小鼠腹水型肝癌H22细胞的超微结构改变。 结果:1、给予不同低温冷冻处理后，肝癌H22细胞存活率不同，温度越低，存活率越低，差异具有显著性;2、在同一温度下，As2O3对肝癌H22细胞具有不同程度的细胞抑制及促进凋亡作用，细胞抑制呈浓度相关性，2μmol/mL浓度下细胞凋亡率最高;3、在相同浓度的As2O3处理下，不同温度的氩氦冷消融对肝癌H22细胞具有不同程度的细胞抑制或杀伤作用，且温度越低，杀伤抑制作用越强;4、无As2O3干预情况下，氩氦冷消融治疗不仅可直接导致细胞坏死，而且可加速肝癌H22细胞的凋亡进程，其对肝癌H22细胞的促凋亡作用随温度降低而增强。5、随着温度降低，肝癌H22细胞的超微结构发生改变:细胞正常膜系结构改变、破坏，细胞质中出现多个空泡状结构，细胞器溶解、消失，细胞核固缩、深染，核膜失去完整性，核双层膜间隙显示不规则增宽，逐渐形成一高电子密度的小团块即凋亡小体。 结论:1、氩氦冷冻消融治疗并不能完全杀死冰球覆盖范围内的肝癌H22，故仍有复发可能;2、氩氦冷消融对细胞的杀伤以急性损伤为主，联用As2O3后，对细胞凋亡的诱导作用优于单独使用氩氦冷消融或As2O3;3、氩氦冷冻消融技术及三氧化二砷(As2O3)均可抑制肝癌细胞株H22的生长，虽然两者的抗肿瘤机制不同，但两者在抑制生长作用上具有协同作用。