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目的: 髓样抑制细胞(Myeloid-derived suppressor cells，MDSC)是一群来源于髓样祖细胞的异质性细胞，具有未成熟细胞的表型和免疫抑制功能。多年来研究发现Notch信号通路与多种血细胞的发育、分化增殖和凋亡密切相关。本研究的目的是探讨体外诱导小鼠MDSC扩增的方法及影响因素，并进一步分析体外扩增的MDSC Notch信号分子的表达情况，以期为探究MDSC的体外扩增机制及研究MDSC相关疾病的发病机理提供新的思路。 方法: (1)探寻MDSC体外扩增的最佳细胞因子浓度。实验分为五组，分别采用10ng/ml GM-CSF和10ng/ml IL-6、20ng/ml GM-CSF和20ng/mlIL-6、40ng/ml GM-CSF和40ng/ml IL-6、10ng/ml GM-CSF、10ng/mlIL-6刺激2.5×105个/ml的新鲜骨髓细胞培养4d，流式细胞术检测MDSC和MDSC亚群(粒细胞样MDSC: PMN-MDSC和单核细胞样MDSC: MO-MDSC)的比例，并计数MDSC的绝对数。根据实验结果选取出MDSC体外扩增的最佳细胞因子浓度。 (2)探寻MDSC体外扩增的最佳培养时间。实验分为两组，使用10ng/mlGM-CSF和10ng/ml IL-6刺激2.5×105个/ml的新鲜骨髓细胞分别培养2d和4d，流式细胞术检测MDSC、PMN-MDSC和MO-MDSC的比例，并计数MDSC的绝对数。根据实验结果选取出MDSC体外扩增的最佳培养时间。 (3)探寻MDSC体外扩增的最佳新鲜骨髓细胞浓度。实验分为三组，使用10ng/ml GM-CSF和10ng/ml IL-6分别刺激1×105个/ml、2.5×105个/ml、5×105个/ml新鲜骨髓细胞培养4d，流式细胞术检测MDSC、PMN-MDSC和MO-MDSC的比例，并计数MDSC的绝对数。根据实验结果选取出MDSC体外扩增的最佳新鲜骨髓细胞浓度。 (4)采用实时荧光定量PCR和Western blot检测体外扩增的MDSC Notch信号分子的表达。 结果: (1)小鼠MDSC体外扩增的影响因素有:细胞因子刺激浓度、培养时间、新鲜骨髓细胞浓度。 ①细胞因子联合刺激组MDSC的比例均显著高于新鲜骨髓细胞未刺激组和单独GM-CSF或IL-6刺激组（P均＜0.05），但三组之间未见明显差异。五组不同浓度细胞因子刺激组PMN-MDSC的比例均显著低于新鲜骨髓细胞未刺激组（P均＜0.05），而MO-MDSC的比例则显著高于新鲜骨髓细胞未刺激组（P均＜0.05）。提示10ng/ml GM-CSF和10ng/ml IL-6是最佳细胞因子浓度组合。 ②其他培养条件固定时，培养4d的MDSC比例和绝对数均明显高于培养2d的比例（P均＜0.05）。但两组间PMN-MDSC和MO-MDSC的比例未见明显差异（P均＞0.05）。提示4d是最佳培养时间。 ③其他培养条件固定时，骨髓细胞浓度为2.5×105个/ml组诱导的MDSC比例和绝对数均显著高于其他两个细胞浓度组（1×105个/ml、2.5×105个/ml）（P均＜0.05）。但三组间PMN-MDSC和MO-MDSC的比例未见明显差异（P均＞0.05）。提示2.5×105个/ml是最佳新鲜骨髓细胞浓度。 (2)MDSC体外扩增体系中Notch信号相关分子的表达情况。 与新鲜骨髓细胞相比，MDSC体外扩增体系中Notch信号相关受体 Notch3的mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P均＜0.05），而Notch1、Notch2和Notch4表达水平无明显差异P均＞0.05）;Notch信号相关配体Jaggedl mRNA的表达水平明显增高(P＜0.05)，Dll1和Dll4的表达水平则显著下降（P均＜0.05），而Jagged2的表达水平未见明显差异(P＞0.05);Notch信号通路中下游活化靶基因Hes1 mRNA的表达水平也显著低于新鲜骨髓细胞(P＜0.05)，而Hes5和Hey1的表达水平无明显差异（P均＞0.05）。 结论: 本研究成功建立小鼠MDSC的体外扩增体系。在MDSC的体外扩增体系中Notch信号下调。该结果为进一步研究MDSC体外扩增的机制及其在肿瘤、慢性炎症等疾病中的免疫调节作用提供了新的思路。