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猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的一种高致病性接触性肠道传染病,主要危害哺乳仔猪,造成很高的死亡率。从乳汁中获得母源抗体是哺乳仔猪抵抗PEDV最主要的途径,母乳中含有的分泌性IgA能保护哺乳仔猪的肠道粘膜,具有抵抗病毒入侵的作用。目前的商品化PEDV血清抗体检测试剂盒主要是针对血清中的中和抗体或IgG。因此,研究针对母乳中的IgA抗体的ELISA检测方法对于哺乳仔猪感染PED的防制具有重要意义。本研究将PEDV-N蛋白基因克隆到pCold I载体,原核表达并纯化获得的重组N蛋白,用于构建检测PEDV IgG抗体及IgA抗体间接ELISA方法,并命名为IgG-ELISA及IgA-ELIS A,该方法可用于检测血清或乳汁中的IgG. IgA抗体水平。用本研究构建的方法对实验室PEDV攻毒猪进行血清抗体跟踪检测试验,结果发现：PEDV攻毒7d后即检测到血清中的IgG及IgA抗体水平转为阳性,IgG抗体水平在攻毒后16d后达到峰值,与IgG比较,IgA抗体水平攀升较为缓慢,攻毒后53d左右IgA抗体水平达到峰值,大部分PEDV攻毒猪IgG及IgA抗体持续时间可达120d以上。IgG-ELISA与中和试验对比,共检测了84份攻毒试验猪的跟踪血清,结果显示：检测血清的阴性符合率为70.6%,阳性符合率为91%,总符合率为86.9%。与加拿大Biovet公司的商品化PEDV IgG抗体检测试剂盒对比,共检测了77份临床血清,检测血清的阴性符合率为64.5%,阳性符合率为66.7%,总符合率为64.9%,并将两种检测方法检测不一致的血清用中和试验进一步判定,IgG-ELISA与中和试验总符合率为71.4%,而加拿大试剂盒与中和试验阳性总符合率仅为28.6%。IgA-ELISA方法与韩国安捷公司IgA抗体试剂盒进行了对比,共检测60份免疫PEDV疫苗的母猪的乳汁样品,IgA-ELISA方法的阳性率为100%,两者符合率为98.3%,但对比的阴性样品太少,需进一步验证。试验结果表明,本研究构建的IgG-ELISA 及 IgA-ELIS A检测方法具有较好的敏感性和特异性,为进一步开发临床检测试剂盒奠定了基础。此外,本实验研究中发现PEDV抗N蛋白的IgG抗体水平消长规律与中和抗体消长规律整体趋于一致。通过对免疫母猪乳汁、血清及其所产仔猪血清的IgG及IgA抗体进行检测,结果发现：母猪血清及乳汁中的IgG及IgA抗体水平,与所产仔猪血清中的抗体水平呈正相关。