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本文以我国重要的淡水种类瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)为养殖对象,在室内循环水系统中进行70d的摄食生长实验,研究饲料蛋氨酸对瓦氏黄颡鱼幼鱼生长和代谢的影响及半胱氨酸对蛋氨酸的节约作用。主要研究内容及结果如下:1.瓦氏黄颡鱼蛋氨酸代谢基因的克隆、序列分析和组织差异性表达分析利用同源性克隆和3’RACE、5’RACE技术克隆瓦氏黄颡鱼蛋氨酸腺苷转移酶(MAT1A)cDNA全长序列以及胱硫醚β合酶(CBS)、甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)和蛋氨酸合酶(MS)cDNA片段序列。克隆得到的瓦氏黄颡鱼MAT1A(KJ489307)cDNA全长2427bp,包括5’端非编码区(UTR)172bp、开放阅读框(ORF)1173bp、3’端UTR1082bp和编码390个氨基酸。BHMT(KJ489308)核心片段长度为729bp、MS(KJ489309)核心片段长度为501bp和CBS(KJ489310)核心片段长度为920bp。采用实时荧光定量PCR技术确定蛋氨酸(Met)代谢的主要表达组织,结果显示,肝脏中Met代谢基因表达量最高,胃部表达量最低,表明肝脏是Met代谢基因的主要表达组织。2.瓦氏黄颡鱼幼鱼蛋氨酸需求量的研究在基础饲料中分别添加0.0、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5g/100g的晶体DL-Met,以L-Glu作为等氮替代物,配制6组等氮等脂饲料(Met的实测值为0.40、0.73、1.04、1.33、1.70和1.98g/100g饲料),并利用实时荧光定量PCR研究蛋氨酸含量对代谢酶基因表达的影响。研究结果表明,蛋氨酸含量对实验鱼存活率、鱼体组成、肝指数、肝脏谷草转氨酶活力(GOT)、肝脏还原型谷胱甘肽(GSH)含量和血浆溶菌酶活力均无显著性影响(P>0.05)。以特定生长率(SGR)为评价指标,经二次拟合曲线可得瓦氏黄颡鱼幼鱼Met的需求量是1.36%饲料(3.25%蛋白)。随着饲料蛋氨酸含量的增加,肝脏谷丙转氨酶(GPT)活力呈现先升高后降低的变化趋势,最高值出现在投喂Met含量为1.7%饲料组(P<0.05)。随着饲料中蛋氨酸含量的增加,血浆中的GPT活力呈现先升高后平稳的变化趋势,且拐点出现在投喂蛋氨酸含量1.04%(P<0.05)饲料组,而血浆中GOT活力呈现先升高后降低的变化趋势,且最大值出现在投喂蛋氨酸含量为0.73%(P<0.05)饲料组。随着饲料蛋氨酸的增加,MAT、CBS、MS显著上调(P<0.05);BHMT无显著性差异(P>0.05)。3.半胱氨酸对蛋氨酸的节约作用以蛋氨酸含量为1.33%的饲料为基础饲料(同第二个实验的饲料四),在保证总含硫氨基酸(TSAA)量恒定的情况下,以半胱氨酸(Cys)添加量分别替补蛋氨酸(Met)添加量的0%、25%、50%、75%和100%,配制成5组等氮等脂的实验饲料(Met的实测值为1.30、1.08、0.85、0.63和0.40%饲料;Cys实测值0.34、0.56、0.79、1.01和1.24%饲料)。结果表明,饲料Cys对瓦氏黄颡鱼幼鱼的存活率、鱼体组成、肝指数、肝脏谷草转氨酶(GOT)、肝脏还原型谷胱甘肽(GSH)含量和血浆溶菌酶活力均无显著性影响。以特定生长率(SGR)为评价指标,经二次拟合曲线可得瓦氏黄颡鱼幼鱼最适Cys需求量是0.77%饲料(1.84%蛋白),可替代50%的Met添加量,占TSAA的48%。随着饲料中Cys含量的增加,肝脏谷丙转氨酶(GPT)活力呈现先升高后降低的变化趋势,最高值出现在投喂Cys含量为0.79%饲料组。随着饲料中Cys含量的增加,血浆中GPT和GOT均呈现先降低后升高的变化趋势,最低值均出现在投喂Cys含量为0.79%饲料组。