背景：轮状病毒(rotavirus, RV)是引起婴幼儿秋冬季腹泻的最重要病原体,全球每年约有1亿婴幼儿感染RV,其中近50万感染者重症死亡。迄今为止依据RV的VP6特性,发现的轮状病毒共7个组A-G,其中感染婴幼儿的主要为A组轮状病毒。RV的感染与经济和卫生条件的差异不明显,全球各国均有发生,发达国家和发展中国家感染率相似,病死率发展中国家较高。RV的感染给人类带来沉重的疾病伤害和经济负担。目前尚无治疗轮状病毒有效药物,研制疫苗是预防和控制RV感染、降低死亡率有效途径。世界卫生组织(world health organization, WHO)也积极推动各国政府进行轮状病毒疫苗的研究与开发。目前上市的有Rotarix(基因型为G1P[8])、RotaTeq(基因型为G1, G2, G3, G4,G6和P[8])和罗特威(基因型为G10P[12])三种减毒疫苗。这三种减毒疫苗在预防RV感染起到重要作用。减毒疫苗本身也存在一定共性问题,例如可能发生毒力返祖；疫苗制备过程中的外源因子污染,预存抗体对疫苗有效性的影响；不能用于免疫缺陷或者免疫抑制治疗人群等。因此,开发其他形式的轮状病毒疫苗是一种新的思路,包括灭活疫苗和亚单位疫苗等。无论研制何种形式的疫苗,研究疾病的流行病学动态和病原体特征都是非常重要的。自20世纪70年代RV被发现以来,A组轮状病毒依据病毒VP7糖蛋白抗原(G型)特性至少有14个型,VP4蛋白水解酶(P型)特性至少有19个型,基因型与血清型基本一致。流行病学研究表明,在不同地区和不同时间造成RV流行病毒株基因型是不同的。例如最初流行主要毒株型为G1型,随后出现G3和G2等病毒株的流行。最近在中国多个地区的流行病学资料提示,G9型已经逐渐成为主要流行型。虽然有关RV病毒的研究表明,不同型之间有交叉识别和一定水平的交叉保护作用,但不同型的交叉保护能力存在显著性差异。一般而言,同型的保护效力最高。因此,选择目前或者未来一段时间内主要流行毒株作为疫苗研制的材料,开展RV灭活疫苗的相关基础研究具有重要意义。方法：1)通过主题词“轮状病毒”和‘’rotavirus "分别在中国知网(CNKI)和Pubmed对2003-2013年进行文献回顾性检索,并对采集到的文献进行流行病学相关数据分析;2)用医学生物学研究所分子生物学研究室分离的ZTR18(G9型)野生RV毒株,经罗猴胚胎肾传代细胞(MA104细胞)传代至第9代,然后进行大规模培养制备病毒液；3)经PAGE检测基因组电泳条带型及稳定性；4)用RT-PCR-测序检测VP7基因型；5)用免疫荧光法(FFA)测定病毒感染性滴度；6)通过超滤和QFF、G-25层析等步骤纯化病毒；7)用终浓度为0.00925%甲醛,进行72小时37℃灭活；8)经细胞病变和荧光灶法检测残余活病毒;9)ELISA测定疫苗制备过程中病毒抗原含量(酶标单位EU)；10)用Lowry法测定超滤液和疫苗灭活后蛋白质含量变化；11)用负染法电镜观察灭活前后RV形态变化；12)选择SPF级ICR雄性小鼠,按不同免疫剂量从320EU起始,倍比递减,共分为7个实验组和一个PBS对照组,每组六只,肌肉注射,共免疫两次,每次间隔14天；13)用ZTR18(G9型)灭活疫苗和ZTR68 (G1型)灭活疫苗,进行双价灭活疫苗评价,双价疫苗中两种单价灭活疫苗均为160EU,采用的实验动物及免疫程序同12);14)经ELISA分析两种单价灭活疫苗和双价灭活疫苗免疫小鼠后血清抗体反应；15)用荧光灶抑制实验(FFIT)检测三种疫苗诱导的血清抗体对ZTR68(G1型)、Wa(G1型)、S2(G2型)、SA11(G3型)、Gottfried(G4型)和ZTR18(G9型)中和效价。结果：1)感染阳性病例数前三省份为广东(186587例),浙江(133390例)和湖北(11104例)；2)感染阳性率最多的前三省份是河南(75.20%)、吉林(64.94%)和宁夏回族自治区(60.16%)；3)G型最多的三个是G3(8509例)、G1(6490例)和G2(1601例)；4)G型中G9型RV最近几年呈现病例数快速增长的态势；5)P型最多的前三个是P8(8483例)、P4(2017例)和P6(740例)；6)在中国治疗主要采用的是疫苗预防结合临床对症治疗的方式；7)PAGE证明病毒传代过程中基因组条带与原始株相同；8)RT-PCR-测序及序列比对证实病毒传代过程VP7基因未发生变异；9)FFA法测定病毒滴度为105.17CCID50/ml; 10)ELISA检测经超滤,纯化,灭活后疫苗的抗原含量为1600EU/ml;11)Lowry法测定,病毒收获液超滤,纯化,灭活蛋白质含量从收获液的0.8 mg/ml降为灭活的0.16 mg/ml; 12)负染法观察灭活前后RV形态,均可见完整的病毒颗粒；13)动物实验结果表明,ZTR18(G9型)灭活疫苗以160EU/100μl为最佳免疫剂量。14)ELISA测得双价灭活疫苗免疫小鼠的血清ELISA效价比ZTR68(G1型)和ZTR18(G9型)两个单价灭活疫苗的效价高；15)同型和交叉中和实验结果表明,双价轮状病毒灭活疫苗及两种单价灭活疫苗免疫小鼠的血清与ZTR68(G1型)、Wa(G1型)、S2(G2型)、SA1 1(G3型)、Gottfried(G4型和ZTR18(G9型)六个RV血清型均有一定交叉中和作用。结论：1)流行病学研究的提示,G9型RV可能会成为未来RV主要流行型。2)用目前的制备方法可获得具有良好免疫原性的实验性疫苗3)双价灭活疫苗诱导产生的ELISA抗体效价要比单价高；5)抗ZTR68(G1型)和ZTR18(G9型)抗体可中和ZTR68(G1型)、Wa(G1型)、S2(G2型)、SA11(G3型)、Gottfried(G4型)和ZTR18(G9型)六种血清型RV,但中和程度(效价)在不同型间存在一定差异,同型中和效价高于异型。