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目前,HIV-1感染的预防和控制对人类来说仍然是一个未解的难题。HIV-1为单链RNA病毒,属于逆转录病毒科(Retroviridae),慢病毒亚科(Lentivirus)。该病毒为圆形或椭圆形,直径约90~140nm,外层为类脂包膜,表面有锯齿样突起,内有圆柱状核心,病毒的包膜是糖蛋白gp160(由gp120和gp41组成),为该病毒的结构蛋白,其中gp120为外膜蛋白,gp41为跨膜蛋白(trans-membrane protein)。gp120与CD4结合后相互作用,引起gp120发生一系列构象变化,进而形成高亲和力的CCR5/CXCR4结合位点,协助HIV-1进入宿主细胞。结构蛋白还包括p24核心蛋白和p18基质蛋白。目前的许多研究表明,针对该病毒的中和表位主要存在于gp160。 本课题运用噬菌体抗体库技术,以期获得人源抗HIV-1 gp160基因工程抗体。首先采集无症状、HIV-1抗体滴度高的HIV-1感染者全血,分离淋巴细胞后提取总RNA,反转录为cDNA第一链,然后利用一组人源抗体IgG1 Fab段基因的引物对抗体的轻链和重链Fd段基因进行PCR扩增,再将扩增后的轻链、重链基因先后克隆到pComb3X载体,转化XL1-Blue,在辅助噬菌体的辅助作用下,构建了噬菌体抗体库,库容为8×10~6,最后用预包被gp160的ELISA板对噬菌体抗体库进行筛选,经过三轮“吸附—洗脱—富集”的筛选过程,将获得的克隆进行诱导表达,表达产物经ELISA检测,结果获得11株抗HIV-1 Fab克隆。 在pComb3X载体中,轻链和重链Fd基因的信号肽分别为ompA和pelB,以这两个信号肽为模板,分别设计了轻链和重链的测序引物,对所获得的11株阳性克隆的轻链和重链基因进行了测序。运用EMBL EBI数据库提供的ClustalW对所获得的轻链基因序列和重链基因序列进行了同源性比较,结果获得了10条轻链基因(κ、λ链各5条),8条重链基因;通过与HIV序列数据库中的基因