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P.e属产黑色素类杆菌群,是牙髓及根尖周感染的重要致病菌。国际上对P.e的检测方法还没有标准化,传统方法都有一定局限性,必须在细菌数目及产生的酶到达一定量时才能得到阳性结果。近年来,随着分子生物学技术的发展,已有更多的鉴别方法从DNA分子水平揭示P.e的存在情况,公认较好的鉴定方法是以16S rRNA基因顺序设计的特异引物PCR,其优点在于反应快速,敏感性高,特异性强。随着对致病菌研究的深入,有学者发现P.e在感染根管中约占厌氧菌的66﹪,同时P.e与牙髓坏死、根尖部疼痛肿胀、叩痛症状和窦道形成密切相关。因此,单纯用Pe检出率不能反映不同慢性根尖周炎临床症状下Pe数量的差异。为了更好的进行慢性根尖周炎诊断、治疗以及疗效评估,明确Pe数量与慢性根尖周炎临床症状的关系以及在根管治疗过程中检测P.e数量的改变十分必要。本实验采用PCR检测慢性根尖周炎临床标本中的Pe,计算其检出率,以反映P.e在慢性根尖周炎中的存在情况。采用PCR和FQ-PCR检测慢性根尖周炎临床标本中P.e16s rDNA的水平,探讨其与临床症状的关系,以期通过检测P.e16S rDNA水平来指导慢性根尖周炎的诊断和治疗。
国内外对P.e致病机制的研究刚刚起步,主要集中在两个方面,一是P.e与其他感染根管致病菌的相互关系;二是毒力因子的研究,如:内毒素、蛋白水解酶、胶原酶、细胞毒性代谢产物(乙酸、丁酸、吲哚、硫化氢等),以及细菌的结构蛋白如外膜蛋白、荚膜等。研究表明卟啉菌属大部分菌种在单独接种时,不具有感染性,只有P.g的个别菌株在单独接种时能诱发脓肿和感染。因此,卟啉菌属细菌间的相互作用与致病性密切相关。同时多位学者发现在急性根尖周脓肿中Pe、P.g总是同时检测到,并有抑制其他细菌生长的作用,说明两者的协同作用在.P.e的致病性中占重要地位。本实验采用PCR和FQ-PCR.检测慢性根尖周炎感染根管中Pel6s rDNA和Pgl6S rDNA基因水平,定性和定量的研究Pe、P.g在慢性根尖周炎感染根管中的存在情况,为研究P.e与P.g的相互作用机制开辟开端。
结果发现:
(1)PCR检测慢性根尖周炎临床标本中P.e的检出率为50﹪。
(2)PCR检测慢性根尖周炎临床标本中Pel6S rDNA相对核酸量,经统计学分析,Pel6S rDNA相对核酸量与咬合痛及患牙伸长不适感之间存在具有统计学意义的显著正相关关系,与根尖骨质吸收,叩痛,窦道脓性分泌物及根尖扪痛之间存在具有统计学意义的显著正相关关系。与根尖肿痛,牙龈退缩,牙周袋形成,根分歧病变,牙齿松动,窦道形成,牙龈红肿之间未发现具有统计学意义的相关关系。
FO-PCR检测慢性根尖周炎临床标本中P.e16s rDNA的含量,经统计学分析,P.e16s rDNA的含量与咬合痛及患牙伸长不适感之间存在具有统计学意义的显著正相关关系,与根尖骨质吸收,叩痛,窦道形成,窦道脓性分泌物及根尖扪痛之间存在具有统计学意义的显著正相关关系。与根尖肿痛,牙龈退缩,牙周袋形成,根分歧病变,牙齿松动,牙龈红肿之间未发现具有统计学意义的相关关系。
(3)PCR检测在100例慢性根尖周炎临床标本中,50例标本能检测到Pe,35例标本能检测到P.g。在50例检测到P.e的标本中,29例标本中P.e和P.g同时检出。
FQ-PCR检测50例慢性根尖周炎临床标本均能检测到P.e,42例标本中P.e和P.g同时检出,且Pe和P.g16S rDNA的含量具有显著正相关关系。
综上,P.e在慢性根尖周炎临床标本中较高的检出率及其与临床症状之间的密切相关性,提示P.e可能与根管感染密切相关。慢性根尖周炎临床标本中P.e和P.g常同时检出,而且在数量上具有显著正相关关系,提示P.e和P.g在致病性上可能存在相互促进的作用。