Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)是参与天然免疫的一类重要蛋白质分子,也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁。在人类中已经鉴定了10种TLRs,在小鼠中有13种,其广泛分布于多种细胞表面,但主要表达于和宿主防御功能有关的细胞,如单核巨噬细胞、粒细胞、树突状细胞、淋巴细胞、内皮细胞和上皮细胞等。在特定条件下,TLRs异常表达并过度激活,导致机体功能紊乱,引发各种疾病,例如炎症性肠病(IBD)、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(AR)等。因此,寻找新的能够调控TLRs信号通路的阻断物,可有望为治疗TLRs信号过度活化相关的免疫疾病带来新希望。D182是一种海洋来源的共生菌产物,我们前期研究发现其对LPS诱发的小鼠脓毒症模型具有治疗作用,本文以D182为研究对象,对其治疗DSS诱导的小鼠肠炎及其分子机制行了研究。1、小分子化合物D182能改善DSS诱导的小鼠急性肠炎的相关症状炎症性肠病(IBD)是由多种因素引起的局部炎症,且相关TLRs信号通路在其发病过程中其关键作用。为了探究D182的体内抗炎效果,我们构建了DSS诱导的小鼠急性肠炎模型,分析了D182对炎症性肠病的改善作用。结果显示D182可显著降低小鼠体重的减轻、便血程度显著减轻、抑制结肠部位相关炎性因子的产生和改善结肠部位组织病理损伤,显示出了良好的治疗效果。2、小分子化合物D182能抑制小鼠巨噬细胞炎性因子的表达首先我们用CCK-8试剂盒检测其对RAW264.7细胞和小鼠腹腔原代巨噬细胞细胞活力的影响,结果显示D182在1～100uM浓度范围内对RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞的活力无影响,然后我们在此剂量范围内研究D182的抗炎作用。首先用Griess Reagent法检测了D182对多种TLRs配体刺激RAW264.7细胞产生NO的影响,结果显示其对多种TLRs配体刺激RAW264.7细胞产生NO均有一定的抑制作用。然后用ELISA法及荧光定量PCR和ELISA法检测了不同浓度PAM、LPS、PGN诱导的RAW264.7细胞和小鼠巨噬细胞炎性因子mRNA和蛋白表达的影响,荧光定量PCR结果显示,D182能剂量依赖性地抑制PAM、LPS、PGN诱导的RAW264.7表达TNF-α、IL-6。ELISA法检测结果显示D182(5、15、45uM)能剂量依赖性地抑制PAM、LPS、PGN诱导的RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α。3、小分子化合物D182治疗小鼠肠炎的分子机制为了探索D182治疗小鼠肠炎的分子机制,我们分析了TLR2、4、6信号通路,发现它们都通过MyD88信号通路,我们用模拟分子对接的方法模拟TLR4信号通路中游蛋白和D182是否有结合,发现D182和IRAK4活性中心有结合,Western实验揭示D182对于IRAK4及其IRAK1的活化有一定抑制作用,并在体内验证了其对IRAK4的活化有影响。综上所述,我们首次证明,小分子化合物D182能有效抑制TLRs介导的巨噬细胞的活化,这种活化的抑制与D]82与IRAK4活性中心结合从而下调下游通路相关分子的活化有关；D182也能改善炎症性肠病的发病进程。提示D182有望成为治疗炎症性疾病的候选药物。