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目的:探讨Twist基因调控结肠癌细胞系发生上皮间质转化(EMT)的作用机制,进而明确其对恶性肿瘤侵袭转移能力的影响。方法:培养人结肠癌细胞系SW480, HCT116和HT29,应用RT-PCR和Western blot法检测三种细胞系Twist的mRNA和蛋白表达,确定三种细胞系中Twist的表达水平。提取和纯化重组pTracer-CMV/BSD-Twist, pTracer-CMV/BSD, pGenesill.2-Twist-shRNA和pGenesill.2-shRNA质粒后,阳离子脂质体介导分别转染至结肠癌细胞系HCT116,实验分五组:(1)上调实验组:转染质粒pTracer-CMV/BSD-Twist(2)上调阴性对照组:转染空质粒pTracer-CMV/BSD;(3)下调实验组:转染质粒pGenesill.2-Twist-shRNA;(4)下调阴性对照组:转染空质粒pGenesill.2-shRNA;(5)空白对照组:未转染细胞。应用实时荧光定量PCR和Western blot检测结肠癌细胞系HCT116的Twist, Ecadherin和Vimentin mRNA及蛋白水平表达。MTT法检测转染后细胞的生长增殖能力,Transwell小室迁移实验和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:转染48小时后,倒置荧光显微镜下可见质粒转染组中细胞表达绿色荧光蛋白。三种人结肠癌细胞HCT116、HT29和SW480中HCT116的Twist mRNA和蛋白表达比较高。五组HCT116细胞Twist基因、Ecadherin基因、Vimentin基因的mRNA转录水平和蛋白表达水平显示:1)pTracer-CMV/BSD-Twist质粒转染人结肠癌细胞系HCT116后抑制E-cadherin (P<0.05),促进Twist和Vimentin mRNA及蛋白质的表达(P<0.05)。2)干扰Twist质粒pGenesil1.2-Twist-shRNA转染人结肠癌细胞HCT116后可以抑制Twist和Vimentin mRNA及蛋白质的表达(P<0.05)。但是对E-cadherin没有作用((P<0.05)。3)相关性分析显示在mRNA和蛋白水平,Twist基因与Ecadherin基因的表达均呈负相关(P<0.01),与Vimentin基因的表达均呈正相关(P<0.01)。4)重组质粒转染后对三种细胞系的增殖和活力的没有影响。5)质粒pGenesill.2-Twist-shRNA转染组在Transwell小室迁移和侵袭实验明显受到抑制(P<0.01)。质粒pTracer-CMV/BSD-Twi st转染组在Transwell小室迁移和侵袭实验明显增强(P<0.01)。结论:1、在人结肠癌细胞系HCT116, HT29和SW480中,HCT116的Twist基因表达水平最高。2、在HCT116结肠癌细胞上调Twist基因表达后,Ecadherin低表达、Vimentin高表达,说明Twist基因可能通过抑制Ecadherin蛋白表达,上调Vimentin蛋白表达促进了EMT分子事件的发生,进而增强肿瘤细胞的转移能力。3、干扰Twist基因可以有效地沉默结肠癌细胞系HCT116Twist基因的表达,逆转上皮间质转化,有效的抑制了结肠癌细胞的侵袭迁移。