论文部分内容阅读
在人类的适应性免疫反应系统中,T细胞参与的免疫反应是至关重要的。在人体中,90%以上的T细胞表达的T细胞受体是αβTCR,其可以特异性识别抗原呈递细胞表面的主要组织相容性复合物及其呈递的抗原分子pMHC,并经由其共受体CD3进行下游的信号传递,从而开启T细胞介导的特异性免疫反应。TCR-CD3复合物特异性识别pMHC复合物是T细胞免疫反应的关键性环节,在近几十年来,许多科学家对TCR以及pMHC的胞外域之间的相互作用机制以及结构基础进行了大量的研究。然而,完整的TCR-CD3复合物是如何与pMHC复合物相互作用的,TCR是如何将识别pMHC的信号传递给CD3的,这些关键问题都仍未得到解答。本研究中使用哺乳动物表达体系表达纯化TCR-CD3复合物及其共受体CD4,使用大肠杆菌表达体系表达纯化pMHC复合物包涵体并经由稀释复性获得其活性蛋白。在获得相应蛋白的基础上,通过分子筛层析、Octec RED96e检测亲和力以及TEM观察,发现TCR-CD3复合物能与pMHC复合物直接结合,其亲和力为70.7nmol/L。通过加入共受体CD4分子、交联剂以及引入点突变的方法研究增加TCRCD3-pMHC复合物的稳定性及均一性的方法,结果显示加入共受体CD4分子以及引入点突变的方法对TCR-CD3复合物与pMHC复合物结合并没有显著的影响,加入交联剂能够使TCR-CD3复合物与pMHC复合物结合更加紧密,但是最终复合物的均一性仍然不高。综上所述,本文初步探究了TCR-CD3复合物与pMHC复合物直接进行相互作用的结果,并研究了加入CD4、交联剂以及引入点突变对二者相互作用的影响,为后续TCR-CD3复合物与pMHC复合物相互作用的结构生物学研究提供了相应的方向及基础。