开口箭提取物对免疫性肝损伤的改善作用及机制研究

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开口箭是湖北民间治疗咽喉炎、扁桃体炎且疗效显著的中药,对其化学成分的研究表明具有大量的潜在活性成分,主要是甾体皂苷类和生物碱类,其中一些为强心苷。迄今为止,关于开口箭作用机制特别是有关炎症免疫方面作用机制的报道尚少见。本研究主要考察了开口箭提取物对2,4,6-三硝基氯苯致小鼠迟发型超敏反应(PC1-DTH)的抑制作用、Con A诱导的免疫性肝损伤和CC14诱导的肝损伤的影响,从而确定开口箭对免疫性肝损伤的改善作用并探讨可能的作用机制。本文第一章首先完成了开口箭有效成分的提取和鉴定。结果显示,经过70%乙醇提取开口箭根茎,浸膏得率为60.37%。经过HPLC分析,浸膏中含有已报道的主要活性成分。进一步考察其对迟发型超敏反应(PC1-DTH)的抑制作用。结果显示,开口箭显著抑制了小鼠耳肿胀。耳组织病理学检查也显示开口箭对真皮水肿、组织充血、炎细胞浸润具有改善作用。在第二章中,首先考察了开口箭提取物对Con A诱导的小鼠免疫性肝损伤的作用。结果显示,开口箭显著抑制小鼠血清中ALT、AST和LDH含量的升高。肝脏病理学检查也显示开口箭能够明显改善Con A诱导的多项肝损伤症状。对模型中炎症细胞因子的考察,发现开口箭在体内可显著降低血清、肝组织、脾脏及淋巴结中TNF-α、IFN-γ的水平。研究其对肝损伤改善的作用机制,显示开口箭通过调控STAT1、NF-κB、ERK来调控下游相关蛋白的表达水平。开口箭粗提物对免疫炎症相关蛋白的上调或下调,揭示其对特殊的作用机制。为进一步明确开口箭改善肝损伤的作用环节,我们考察了以肝细胞直接损伤为主的CC14小鼠急性肝损伤模型,研究发现,开口箭提取物没有改变小鼠血清中ALT、AST的含量,表明其对CC14诱导的肝损伤并无明显减轻作用。本章研究表明开口箭可能通过影响免疫系统的功能从而实现肝保护。本文第三章研究了开口箭体外对T淋巴细胞的存活、增殖、活化、凋亡等功能的影响。研究结果显示:开口箭提取物对T淋巴细胞没有毒性,亦不能明显影响其活化。但对活化T淋巴细胞中的各炎症因子的表达有抑制效果,并能显著促进活化T淋巴细胞的凋亡。综上所述,本论文研究了开口箭提取物对免疫性肝损伤的改善作用,结果表明开口箭可通过抑制T细胞炎症因子的表达及诱导活化T细胞的凋亡来实现免疫炎症的改善,为其未来的开发和应用提供了药理学依据。
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