论文部分内容阅读
目的：
通过对早孕绒毛滋养层细胞的分离，纯化和培养，寻找一种适于实验研究的人绒毛滋养层细胞层细胞的原代培养方法，通过RNA干扰技术抑制性激素结合球蛋白(Sex hormone binding globulin，SHBG)基因表达，从而研究SHBG的生物学行为。
方法：
无菌条件下获取正常妊娠6～8周早孕绒毛组织，经胰蛋白酶/DNA酶Ⅰ联合消化，Percoll密度梯度离心法对得到的细胞进行纯化，将最终获得的绒毛滋养层细胞应用免疫细胞化学法对其纯度加以鉴定，并同时进行原代培养。将原代培养的滋养层细胞分成6组:(1)空白对照组(2)转染脂质体组(3)转染非特异性siRNA组(4)转染特异性siRNAⅠ(5)转染特异性siRNAⅡ(6)转染特异性siRNAⅢ，于转染36小时后采用双染流式细胞术检测绒毛滋养层细胞凋亡情况，采用CellQuest功能软件进行分析。
结果：
成功培养了人早孕绒毛滋养层细胞，经免疫细胞化学试剂盒染色，细胞角蛋白(CK-7)染色阳性和波形蛋白(v9)染色阴性，染色阳性率＞90％。各组细胞于转染36小时后进行流式细胞凋亡检测，凋亡率结果如下:(1)空白对照组凋亡率8.89±0.36(2)转染脂质体组凋亡率8.64±0.87(3)转染非特异性siRNA组凋亡率9.24±0.60(4)转染特异性siRNAⅠ凋亡率14.61±3.05(5)转染特异性siRNAⅡ凋亡率14.37±2.47(6)转染特异性siRNAⅢ凋亡率16.91±2.61。可见转染特异性siRNA后细胞凋亡率增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
结论：
人早孕绒毛组织经胰蛋白酶/DNA酶Ⅰ联合消化，Percoll密度梯度离心法对得到的细胞进行纯化可得到纯度较高的滋养层细胞。对原代培养的滋养层细胞进行RNA干扰抑制SHBG基因的表达，可诱导滋养层细胞凋亡。
意义：
通过对滋养层细胞进行siRNA的基因干扰，抑制滋养层细胞中SHBG基因表达，导致滋养层细胞过度凋亡。GDM时由于血中高胰岛素水平抑制了绒毛滋养细胞SHBG的自分泌或旁分泌从而导致SHBG减少，GDM时胎盘滋养细胞损伤也导致了合成和分泌SHBG减少，而SHBG减少又导致滋养层细胞过度凋亡使细胞损伤进一步加重，出现恶性循环，从而加剧了GDM发病的严重性。