论文部分内容阅读
第一部分骨髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)及其亚群在原发性肺腺癌患者的分布情况及NF-κB信号通路在MDSCs促进肿瘤进展中的作用目的:旨在探讨肺腺癌肿瘤微环境中的MDSCs及其亚型在肺癌组织、近癌肺组织及远癌肺组织中的分布。方法:本研究自2017年8月至2018年1月收集纳入天津医科大学肿瘤医院食管肿瘤科及肺部肿瘤科53例IA-IIIA期未接受术前新辅助治疗的肺原发腺癌患者,收集术中新鲜组织标本,包括肿瘤组织、近癌肺转移、远癌肺组织,利用流式细胞术检测MDSCs及其亚型比例,并分析其与临床病理特征的关系;采用免疫荧光方法检测肺腺癌癌组织、近癌肺组织及远癌肺组织中CD33与Arg1、i NOS、NF-κB的共定位情况。结果:1.肺腺癌患者远癌肺组织及近癌肺组织中总MDSCs细胞比例高于癌组织中的总MDSCs的比例;远癌肺组织中单核细胞MDSCs(monocytic-MDSCs,M-MDSC)细胞比例与近癌肺组织中、癌组织中的比例相当;肺腺癌患者远癌肺组织中多形核MDSCs(polymorphonuclear-MDSCs,PMN-MDSCs)细胞比例与近癌肺组织中的PMN-MDSCs细胞比例相当;近癌肺组织中PMN-MDSCs细胞的比例明显高于癌组织中的PMN-MDSCs细胞比例;2.磨玻璃结节肺腺癌患者远癌肺组织中M-MDSC细胞比例略高于近癌肺组织中,近癌肺组织中PMN-MDSCs细胞的比例明显高于癌组织;3.非磨玻璃结节的肺腺癌中,远癌肺组织中总MDSCs细胞比例略高于近癌肺组织;近癌肺组织中高于癌组织,近癌肺组织中PMN-MDSCs细胞的比例明显高于癌组织;4.非磨玻璃结节肺腺癌远癌肺组织中的MDSCs细胞的比例略高于磨玻璃结节;非磨玻璃结节肺腺癌近癌肺组织中的MDSCs细胞的比例略高于磨玻璃结节肺腺癌;非磨玻璃结节肺腺癌中,直径大于2cm远癌肺组织中MDSCs细胞在总的单个核细胞中的比例高于直径小于2cm者;5.有病理高危因素远癌肺组织中MDSCs细胞比例高于无病理高危因素,有病理高危因素近癌肺组织中MDSCs细胞比例高于无病理高危因素;6.吸烟患者肺癌组织中MDSCs细胞比例高于不吸烟者MDSCs;近癌肺组织的MDSCs与未成熟粒细胞百分比具有相关性,癌组织中的PMN-MDSCs细胞比例与未成熟粒细胞绝对值具有相关性。7.癌组织、近癌肺组织及远癌肺组织中CD33与Arg1、CD33与iNOS、CD33与NF-κB共定位;近癌肺组织与远癌肺组织中的MDSCs和淋巴细胞明显高于癌组织。结论:远癌肺组织及近癌肺组织中总MDSCs细胞比例高于癌组织中的总MDSCs的比例,且其比例与是否是磨玻璃结节、肿瘤大小、病理高危因素及吸烟与否等因素相关;MDSCs细胞在肿瘤的发生过程具有重要作用,而NF-κB信号通路的激活是MDSCs细胞促进肿瘤的发生过程的主要机制。第二部分肿瘤坏死因子通过NF-κB信号激活MDSCs促进肺癌进展目的:探讨荷瘤小鼠MDSCs在体外对肿瘤细胞的作用并阐明TNF介导MDSCs促进肺癌发生的相关机制。方法:我们从正常小鼠及荷瘤小鼠脾脏及肺脏中用磁珠分选方法分选MDSCs,与肿瘤细胞共培养,用CCK8方法检测肿瘤增殖情况;用Boyden小室体外与肿瘤细胞共培养,观察MDSCs对肿瘤的侵袭及迁移作用的影响;用ELISA方法检测共培养上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平。应用TNF过表达的K-ras G12D基因突变的肺腺癌小鼠模型,采用流式细胞术、酶联免疫吸附试验、Western Blot及免疫组化等分子生物学技术研究TNF影响MDSCs浸润情况及其具体分子调控机制。结果:1.MDSCs对肿瘤细胞无增殖促进作用;2.荷瘤小鼠及正常小鼠脾脏及肺脏MDSCs均可促进肿瘤细胞侵袭能力;3.荷瘤小鼠脾脏及肺脏MDSCs可促进肿瘤细胞迁移能力;正常小鼠脾脏MDSCs可促进肿瘤细胞迁移能力。4.正常小鼠的脾脏、荷瘤小鼠脾脏及肺脏的MDSCs与肿瘤细胞共培养后TNF-α水平均高于对照组;5.TNF通过募集MDSCs细胞浸润并可能通过NF-κB信号激活MDSCs,造成IL-6分泌增加,激活肿瘤细胞的STAT3信号通路,促进肿瘤增殖和促血管生成微环境形成。结论:荷瘤小鼠MDSCs促进肿瘤细胞侵袭及迁移能力而促进肿瘤进展。