现代生活在给人们带来高效便捷的同时,也带来诸多健康问题,失眠是其中最常见和最普遍的问题之一。失眠是以入睡困难,睡眠质量下降和睡眠时间减少为主要特征的综合性神经系统失调症状。长期失眠可导致记忆力、注意力、免疫力下降,并诱发其他疾病,如焦虑、抑郁,甚至成为阿尔兹海默症和帕金森综合症等神经退行性疾病的重要促发因素。人类睡眠受到中枢中多种受体的调节,多巴胺受体是其中非常重要的一类,而多巴胺受体各亚型中,D₂亚型在调节睡眠、情绪、神经兴奋和抑制中发挥重要作用,以D₂为靶标的小分子药物可能具有调节神经兴奋性,调节情绪、睡眠等功能。中国自古以来拥有宝贵的中医中药传统,植物药资源丰富。中药提取物和源于中药的化合物的靶标发现和机制研究是推动新药研发的有效途径。本研究在实验室构建的多巴胺受体D₂、D₃,食欲素受体OX₂、褪黑素受体MT₂稳定细胞株的基础上,对57种化合物进行了筛选,得到了13种靶点明确可作为新药开发的先导化合物。此外,本研究还探讨了天麻发挥镇静安神作用的机制,结果发现天麻可能通过上调中枢DA系统活性进而调控睡眠,天麻中有效成分天麻素可能通过D₂介导的信号通路发挥功效。多巴胺受体D₂存在两种可变剪接体:D_2L和D_2S,且两者可以介导不同的生理学、药理学反应,本研究的另一部分工作就是成功构建了D_2L和D_2S两个荧光分子探针,为实现多巴胺受体D₂更为精细化药物筛选奠定了基础。本研究的初步研究结果如下:1)利用Western blot鉴定出13个靶点明确、作用可观的中药活性成分。2)发现天麻促进睡眠的作用机制为:天麻可能通过上调中枢DA系统活性进而调控睡眠,天麻中有效成分天麻素可能通过D₂介导的信号通路发挥功效。3)成功构建了D_2L-cfp-flash以及D_2S-cfp-flash两个载体质粒,并筛选出稳定的诱导表达细胞系。