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神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见的颅外实体肿瘤。在发现时多为中、晚期,恶性程度高,发展迅速易转移。尽管经过手术及放、化疗等多手段联合治疗,进展期患者存活率依然很低。因此,如何对NB进行早期诊断、靶向干预以及准确评估预后从而提高其生存率是亟待解决的临床问题。NB的发生、发展被认为是肿瘤基因和微环境多因素参与的结果。目前在NB中已发现几种基因改变预后相关,例如MYCN基因扩增、逆转录酶TERT基因突变、ALK基因突变等。下一代测序发现ARID1基因的改变与NB治疗失败和预后不良有关,提示ARID1基因在NB的发生、发展和转归中可能起到关键作用,具有作为预后评估标志物的可能性,但具体机制不明。循环血外泌体作为肿瘤微环境中重要的致病介质,在NB疾病进展中亦发挥重要作用。外泌体miRNA已用于多种肿瘤的诊断和预后评估。我们通过检测并分析NB病例循环血外泌体中差异表达的miRNA,进一步探索其在NB中的内在作用机制,明确外泌体miNRA对NB诊断和预后评估的作用。目的(1)阐明病例中的arid1蛋白表达与患儿病理分型、临床分期和预后风险分级的相关性;(2)研究ARID1基因对NB的作用及机制;(3)探讨外泌体miRNA对NB的诊断和预后评估意义以及内在作用机制。方法收集上海儿童医学中心154例初发未经治疗的NB肿瘤组织及临床随访资料,免疫组化检测arid1蛋白表达水平,统计分析其与临床相关性;构建敲低ARID1基因的NB细胞株,进行功能实验以及高通量测序分析差异表达的基因通路,并在体外验证;分离15例患者血浆外泌体内miRNA,与健康对照比较,高通量分析其差异表达miRNA并验证,进一步研究其在NB中的作用机制。结果(1)154例NB中,arid1a蛋白失表达率75.3%,arid1b失表达率16.2%,arid1b失表达与预后有关;(2)体外敲低ARID1基因,肿瘤细胞侵袭性增强。其中敲低ARID1B基因,可激活肿瘤细胞的氧化磷酸化;(3)肿瘤患者血浆外泌体高表达miR199a-3p,通过抑制NEDD4基因促进NB细胞的增殖和迁移。结论arid1b蛋白失表达与NB的不良组织学分型、高临床分期以及COG高危有关,可以作为NB预后评估的独立风险因素;体外敲低ARID1B基因可促进NB肿瘤细胞的侵袭性,极有可能是通过激活氧化磷酸化引起的;arid1a蛋白失表达更倾向于与肿瘤的良恶性有关,敲低ARID1A基因会引起一系列肿瘤相关通路和基因上调,NB细胞侵袭性增强;NB肿瘤患者循环血外泌体miR199a-3p呈高表达,通过抑制NEDD4基因促进肿瘤细胞增殖和转移,对NB的诊断和预后评估有指导作用。