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目的:培养的口腔黏膜上皮细胞因其可以用作眼表重建植片,而广泛应用于角膜缘干细胞缺乏症(Limbal stem cell deficiency,LSCD)的治疗。作为角膜缘微环境的重要组成部分,角膜缘微环境细胞(Limbal niche cells,LNCs)在成体干细胞分化的方向上起着关键作用。在本研究中,本课题组研究了LNCs在体外诱导大鼠口腔黏膜上皮细胞(OMECs)向角膜上皮样细胞的转分化的能力。方法:分别采用中性蛋白酶II和胶原酶A从大鼠体内分离了OMECs和LNCs,建立了由它们组成的三维或Transwell共培养体系。3T3和更新的LNCs也被用作Transwell系统的滋养层细胞,以比较它们支持OMECs的能力。采用气液交换法培养,获得复层上皮片。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blot)、H-E染色和免疫荧光等方法对共培养的上皮片进行了表型检测。结果:在大多数共培养体系中,共培养的OMECs表现出角膜上皮样的铺路石形态,并表达角膜上皮特异性标记物CK12和Pax6。此外,本研究发现,与其他组相比,通过更新Transwell中的LNCs,CK12、Pax6和增殖标记Ki67的表达水平得到了上调,这可能是一种提高转化效率的潜在方法。获得的复层上皮片表达CK3和CK12。结论:通过体外联合培养OMECs和LNCs,成功地培养了角膜上皮样的OMECs。此项研究对LSCD的治疗及眼表重建具有重要意义。目的:角膜缘干细胞缺乏是对患者视力的严重威胁,本研究拟观察在体外与角膜缘微环境细胞共培养的口腔黏膜上皮干细胞治疗角膜缘干细胞缺乏的能力。方法:使用碱烧伤的方法构建大鼠全角膜缘干细胞缺乏模型,将在Transwell中培养形成复层的口腔黏膜上皮细胞消化为单个细胞后,进行模型动物结膜下注射,并以注射PBS的组为对照,比较经过注射治疗后角膜透明度,角膜荧光素钠染色及新生血管长度和面积评分。采用CM-Dil活体示踪剂标记注射的细胞,观察它们结膜下注射后的迁移,存活情况。结果:通过HE染色,印记细胞学,免疫荧光染色证实,利用碱烧伤的方法成功构建了大鼠全角膜缘干细胞缺乏模型。结膜下注射转分化的口腔黏膜上皮细胞的组相对PBS注射组具有更少的新生血管面积评分,且对于碱烧伤后,防止结膜侵入具有一定作用。注射后14天时,观察到有少部分CM-Dil标记的细胞进入角膜缘,并依然表达角膜特异性标志物CK12。结论:结膜下注射转分化口腔黏膜上皮细胞对治疗角膜缘干细胞缺乏症,防止角膜结膜化,维持正常角膜表型,有一定作用。