MYB转录因子基因是最大的植物转录因子基因家族之一,参与植物次生代谢调控、激素和环境因子的应答,并对细胞分化、细胞周期以及植物叶片等器官的形态建成具有重要的调节作用,有着广泛的生理作用。转录因子的结构和功能已经成为植物分子生物学领域的研究热点。通过转录因子在转录水平上调控目的基因的表达,是植物对其生长发育及生理代谢调控的一种重要方式。大多数MYB转录因子对植物类黄酮的代谢均有调控作用。近年来,MYB转录因子被证实广泛参与类黄酮代谢途径的调控。研究发现MYB转录因子参与植物苯丙烷类次生代谢途径的调节,其中R2R3-MYB转录因子作为调节蛋白广泛参与苯丙烷类代谢途径的调控,控制植物的花色。到目前为止,几乎所有的报道与花青素合成相关的MYB转录因子均是R2R3-MYB蛋白。而新的研究发现,含有单个MYB结构域的MYB基因CPC在转化烟草中也控制了花色。深化了我们对MYB转录因子的认识,而且为我们实现人为地控制花青素的产量提供了策略。鉴于以上思路,本研究的主要内容包括：1、MYB转录因子EB175067干涉载体构建本试验根据NCBI上矮牵牛的一个EST序列(EB175067)与拟南芥比对认为其为与花色发育相关的MYB类基因,在矮牵牛中克隆出这个基因,利用同源重组方法(BP反应)构建能形成发卡结构的RNAi载体。将GSTs片段整合进入载体Phellsgate2中,形成含有intron的反向重复序列,即ihp-RNA载体。目的载体启动子与终止子之间的设计为attP1-cedB-attP2-intron-attP2-ccdB-attP 1,所以BP反应后形成的表达载体即为含有iniron的目的片段的反向重复序列。2、CPC超表载体和EB 175067干涉载体转化矮牵牛和烟草的研究根据已经构建好的phellsgate2-EB175067,通过农杆菌介导的遗传转化方法将该干涉载体转入早花烟草中。对转化植株进行PCR检测,获得35株阳性转基因苗。CPC超量表达载体,前人已经将其转化到烟草植株中并得到了花色变异的转化植株。因此本试验也将CPC超表载体转入矮牵牛V26中,也是为了进一步验证CPC转录因子的功能和调控机制。对转化植株进行PCR检测,获得了25株阳性转化苗,在下地的15株阳性转化苗中,有一株花色发生变化。与对照相比,花色变淡,花型变小。从前人研究和表型来看,超量表达的CPC确实引起了矮牵牛花色素的变化。3、矮牵牛品种V26遗传转化体系的优化通过对影响农杆菌介导的矮牵牛遗传转化的几个主要因素的探讨,研究矮牵牛遗传转化过程农杆菌侵染时间、共培养时间以及延迟筛选的时间对抗性芽产生率的影响,对其遗传转化体系进行优化。在本试验中,矮牵牛叶片侵染时间为5min,在共培养基上共培三天(不须延迟筛选),然后转入筛选培养基上培养可以明显提高矮牵牛的转化效率。