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背景及目的:慢性肾脏病（CKD）严重危害人类健康,氧化三甲胺（TMAO）是肠道菌群代谢产物中的重要成分,与CKD患者肾脏进展密切相关,对于本病的临床预后具有较高的预测价值。但是目前改善TMAO机体损伤的治疗手段疗效并不令人满意,从中医药中进行开发新的改善肾脏损伤的治疗手段具有广阔的临床应用潜力。苏茵解毒颗粒是导师周恩超教授基于“肾毒”理论和临床经验拟制的经验方,临床疗效显著。CKD患者体内TMAO等肠道菌群代谢产物的异常蓄积与“肾毒”理论中的“肾毒入血”相契合。那么苏茵解毒颗粒是否能通过“解肾毒”减轻“肾毒素”TMAO诱导的肾脏损伤?针对这一科学问题,本课题拟通过临床观察及体内外实验明确苏茵解毒颗粒及其君药紫苏叶“解肾毒”减轻TMAO肾脏损伤的作用及具体机制,进一步完善从“肾毒”论治CKD的理论体系,从而为中医药减轻CKD患者肾脏损伤提供有效的治疗方案。方法:（1）纳入江苏省中医院肾内科门诊34例CKD 3-4期肾虚浊毒证患者,随机分为治疗组与对照组,治疗组采用基础治疗+苏茵解毒颗粒+保肾片治疗,对照组给予基础治疗+保肾片治疗,均观察12周。检测患者治疗前后肾功能相关指标（SCR、BUN、UA、eGFR）、肝功能（AST、ALT）、血钾及中医证候积分的变化,并观察患者治疗过程中可能出现的不良反应。使用液质联用技术检测患者治疗前后血清和尿液TMAO水平的变化,将血尿TMAO水平与肾功能指标进行关联分析。同时,检测苏茵解毒颗粒对于血清和尿液TMAO水平的影响并分析其与苏茵解毒颗粒肾脏功能的保护作用间的关系。（2）在单侧输尿管梗阻诱导建立肾病模型的基础上联合口服1%高胆碱饮食,构建了高胆碱饮食肾病大鼠模型。将实验动物随机分为:对照组、UUO组、UUO+Choline组、UUO+Choline+DMB 组、UUO+Choline+苏茵解毒颗粒（SYJD）低剂量（L）组、UUO+Choline+SYJD 高剂量（H）组、UUO+Choline+紫苏叶水提物（PFAE）（L）、UUO+Choline+PFAE（H）组等,检测各组大鼠肾功能相关指标（SCR、BUN、尿ACR等）变化,病理染色观察肾脏组织结构损伤和胶原沉积情况,ELISA检测血清炎症、纤维化因子水平及尿液肾小管损伤标志物水平。同时,使用液质联用技术检测苏茵解毒颗粒对于血尿TMAO水平的影响,并与肾功能指标进行关联分析。（3）动物实验选择在单侧输尿管梗阻联合口服高胆碱饮食构建高胆碱饮食肾病大鼠模型,细胞实验使用TMAO诱导构建肾小管上皮细胞损伤模型。使用PFAE进行干预后检测肾小管上皮细胞形态及活性变化、凋亡荧光染色及凋亡相关蛋白的表达。通过免疫组化、免疫荧光及western blot等技术检测TXNIP-TRX氧化还原体表达水平、还原态TRX含量、ASK1磷酸化水平及MAPK通路蛋白等的变化,并分别通过使用TRX过表达载体慢病毒、TXNIP si RNA、ASK1 si RNA 转染 NRK-52E 细胞,或使用 ASK1 抑制剂、p38 抑制剂、JNK抑制剂干预等调节通路蛋白水平,观察调节不同水平TXNIP-TRX、ASK1及MAPK通路蛋白对于TMAO诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响。结果:（1）临床观察共有33例CKD 3-4期患者完成最后的临床观察,其中治疗组17例,对照组16例,两组治疗前基线水平齐。CKD 4期患者较CKD 3期患者血尿TMAO水平均显著升高。血清及尿液TMAO水平均与SCR呈正相关,而与eGFR呈负相关。治疗12周后,苏茵解毒颗粒可以显著改善SCR、BUN,提高eGFR水平,降低中医证候积分。而在调节TMAO代谢方面,两种治疗选择均可以降低血清TMAO水平,但仅试验组尿液TMAO排泄增加。并且干预后对于血清TMAO的降低程度与其肾功能改善程度呈正相关。（2）实验大鼠血清生化及尿液检测结果显示TMAO可以显著提高BUN、尿ACR、血清Cysc水平,但对于SCR及ALB未观察到明显影响。肾脏病理染色显示,TMAO主要可以促进结缔组织增生、炎症细胞浸润及纤维化。使用不同浓度苏茵解毒颗粒或PFAE干预模型组大鼠发现苏茵解毒颗粒或PFAE均可以显著降低BUN、SCR及尿ACR水平,减轻肾小管细胞脱落、扩张,减少炎症细胞浸润及胶原沉积。血清及尿液TMAO检测及关联分析显示血清TMAO水平与BUN、SCR及尿ACR呈正相关,而尿液TMAO水平与BUN、SCR及尿ACR呈负相关。苏茵解毒颗粒及DMB均可以显著降低血清TMAO水平,促进尿液TMAO排泄。（3）动物实验显示TMAO可以促进肾病大鼠肾脏细胞,尤其是肾小管上皮细胞的凋亡,诱导线粒体数量减少和结构损伤。而联合PFAE灌胃干预后可以显著减轻肾病大鼠体内TMAO诱导的肾脏细胞凋亡,改善线粒体功能。体外实验显示PFAE可以减轻TMAO对于肾小管上皮细胞形态学和活性的损伤,降低凋亡细胞比例,下调促凋亡相关蛋白表达。免疫组化、免疫荧光及western blot结果显示TMAO可以促进ASK1-JNK通路的活化。使用Selonsertib抑制ASK1活化、SP600125抑制JNK活性或ASK1 si RNA敲低ASK1表达均可以显著抑制TMAO诱导的细胞凋亡。非还原性western blot显示PFAE能减轻TMAO对于还原态TRX的抑制作用。体内外实验显示TMAO可以下调TRX的表达,上调TXNIP水平,而使用PFAE干预后可以逆转这一变化。分别使用si RNA敲低TXNIP及慢病毒转染构建TRX过表达NRK-52E细胞系,结果显示上调TRX或敲低TXNIP均可以显著减轻TMAO诱导的ASK1-JNK通路活化及细胞凋亡。结论:（1）血清TMAO的累积与肾功能恶化密切相关。而尿液TMAO水平与肾功能间的关系可能会因为不同疾病损伤类型等差异而呈现不一致性。（2）苏茵解毒颗粒可能通过促进尿液TMAO排泄,降低循环TMAO水平,从而减轻其诱导的肾脏损伤。（3）TMAO可以促进肾病大鼠肾脏炎症和纤维化进展,加重肾功能的衰退。苏茵解毒颗粒和PFAE均可以改善TMAO诱导的肾功能恶化,减轻肾脏炎症和纤维化。（4）TMAO可以诱导肾小管上皮细胞凋亡,PFAE可以抑制TMAO的促凋亡作用。（5）PFAE可以通过调节TXNIP-TRX氧化还原体,下调ASK1-JNK通路,减轻TMAO诱导的肾小管上皮细胞凋亡。（6）紫苏叶是苏茵解毒颗粒改善TMAO肾脏损伤的关键药物,调节氧化还原平衡及ASK1活性减轻肾小管上皮细胞凋亡是中医药“解肾毒”的重要疗效靶点。