目的:测定新分离病毒株(YN12031,YN12042)的全基因组序列,验证其是否为盖塔病毒(Getah virus,GETV),研究新分离病毒株(YN12031)的生物学表型和分子遗传学特征;构建盖塔病毒基因序列分析数据集,对盖塔病毒的种群特征和时空动力学进行分析;最后分析盖塔病毒在中国大陆的感染情况。方法:第一部分将新分离的病毒株(YN12031)接种在BHK-21细胞上观察细胞病变效应(CPE),并在透射电子显微镜下鉴定该病毒的形态,用噬斑测定法检测病毒增殖的动态变化。设计用于扩增和测定全基因组序列的引物,使用PCR方法进行基因序列扩增。使用DNASTAR软件包中的Seqman软件对测序结果进行拼接和质量分析,使用Clustal X 1.8软件进行序列比对,使用MEGA 6.0进行系统发育和分子进化分析。第二部分在基因库中下载盖塔病毒序列,结合新分离的盖塔病毒(YN12031,YN12042病毒株)基因序列,以及15株本实验室此前在中国分离和鉴定、但未在Gen Bank登录的盖塔病毒毒株基因序列信息,用生物信息学方法构建GETV序列分析数据集。采用蒙特卡洛马尔科夫链(MCMC)统计算法分析盖塔病毒数据集。利用BEAET软件包进行碱基替换速率、最近共同祖先(Time of most recent Ancestor,t MRCA)以及种群动态分析(Beast skyride plot,BSP);采用BEAST v 1.8.1软件包里的Bayesian Stochastic Search Variable Selection(BSSVS)程序进行盖塔病毒的空间动力学研究;使用VMD软件和YASARA软件分析GETV E2蛋白的结构。第三部分利用空斑减少中和实验的方法检测人和多种动物(鸡、鸭、牛、猪、马)血清标本盖塔病毒中和抗体水平。结果:第一部分YN12031病毒株感染BHK-21细胞32小时出现明显的细胞病变。病毒粒子呈圆形,直径70nm左右,有包膜,表面有纤突。分子遗传分析显示,YN12031病毒与甲病毒属病毒如基孔肯雅病毒,辛德毕斯病毒密切相关,并与GETV原型株MM2021处于同一进化分枝中,盖塔病毒E2基因和Capsid基因序列的系统进化分析进一步显示,YN12031病毒与俄罗斯分离盖塔病毒处于同一进化分枝,此外盖塔病毒编码区基因及E2基因同源性分析显示,YN12031病毒与俄罗斯分离盖塔病毒同源性关系最近。第二部分盖塔病毒E2基因的氨基酸差异分析显示,与1955年马来西亚原始株(MM2021)相比,其他盖塔病毒分离株均存在7个共同的氨基酸差异位点,这7个共同位点的突变,导致GETV流行株与原始毒株在结构和电荷分布有差异。盖塔病毒最早出现在距今约145年前,随后逐渐演化出四个明显的进化种群,Group III进化种群是目前国际上在多种蚊虫和宿主动物中流行的,并能引起动物疾病的优势病毒进化种群。盖塔病毒种群进化动态分析显示,盖塔病毒种群动态经过平缓—增长—下降—平缓的种群变化过程。盖塔病毒的播散存在频繁的迁徙事件,马来西亚、日本和云南是盖塔病毒的重要迁徙源泉地区,迁徙事件也是盖塔病毒重要的分布分化机制。第三部分共检测了中国大陆895份人、畜动物血清标本,其中发热患者血清中GETV中和抗体阳性率为8.4%(37/443);禽类动物GETV中和抗体阳性率明显低于猪、马;同样为牛(cattle),奶牛和菜牛对GETV中和抗体阳性率存在巨大差异。发热患者血清标本GETV中和抗体水平从1:10至1:320不等;鸡、鸭和奶牛血清标本中仅可以检测到低滴度(1:10至1:20)盖塔病毒中和抗体;而绝大多数猪、马、菜牛血清标本可以检测到1:640至大于1:2560滴度的盖塔病毒中和抗体。结论:1测定了新分离病毒株YN12031,YN12042的全基因组序列,并证实了病毒株为GETV;生物学表型显示:GETV(YN12031分离株)可引起明显的细胞病变,病毒粒子呈圆形,直径70nm左右,有包膜,表面有纤突;分子遗传分析显示:YN12031病毒与俄罗斯分离盖塔病毒同源性关系最近。2成功构建了GETV序列分析数据集,生物信息学分析显示:GETV流行株和原始株之间存在结构和电荷的变化;GETV最早出现在距今约145年前,随后逐渐演化出四个明显的进化种群,Group III进化种群是主要的优势病毒进化种群;GETV种群动态经过平缓—增长—下降—平缓的种群变化过程;马来西亚、日本和云南是盖塔病毒的重要迁徙源泉地区。3中国大陆人和多种动物血清标本中存在盖塔病毒中和抗体,并且马、猪和菜牛盖塔病毒中和抗体水平显著高于人和其它动物,提示中国大陆人、畜动物存在盖塔病毒的感染,猪、马和菜牛很可能是GETV的扩增宿主。