牛源A型多杀性巴氏杆菌菌苗候选株的筛选及免疫效果的初步评价

来源 :石河子大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:kiddlau2
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:本研究以在新疆北疆部分地区分离得到的9株牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)为研究对象,在确定新疆北疆部分地区疑似病例中分离的Pm流行的血清型及ST型的基础上,筛选出1-2株毒性强、免疫原性好、疫苗保护率高的牛源A型Pm菌苗候选株,用于后期Pm菌苗的研究。方法:(1)采集病料按照常规方法分离培养细菌,对分离菌株进行生化鉴定、16S rRNA及Pm特异性鉴定基因Kmt的PCR鉴定,采用荚膜、脂多糖多重PCR及MLST分型方法对Pm分离株进行分型,初步确定从新疆北疆部分地区疑似病例中分离的Pm主要血清型及ST型。(2)采用PCR方法检测9株牛源Pm分离株的7类25个毒力基因、12类22个耐药基因的分布情况;采用纸片扩散法(K-B法)对9株牛源Pm分离株进行20种药物的敏感性测定;以相同剂量人工感染小鼠筛选强毒株并采用寇氏法测定强毒分离株小鼠半数致死量(LD50);制作病理切片观察被Pm感染死亡小鼠肺脏、肝脏、脾脏的病理学变化。(3)将筛选出的4株Pm分别增菌培养,浓缩至所需要的浓度,0.4%甲醛灭活10h后乳化制备成灭活菌苗;采用间接ELISA方法检测菌苗免疫小鼠后连续5周内产生的抗体水平;采用免疫攻毒保护试验测定4组Pm菌苗对小鼠的免疫保护率;感染死亡小鼠脏器病原菌的分离鉴定及特异性基因的PCR检测。结果:(1)经生化鉴定及PCR鉴定分离得到9株Pm(命名为Pm8、Pm9、Pm12、Pm13、Pm14、Pm17、Pm18、Pm122,PmM6),其中8株Pm的荚膜型:脂多糖型:MLST型均为A:L3:ST1型;另1株Pm的荚膜型:脂多糖型:MLST型为B:L2:ST44型。(2)9株Pm分离株的17个毒力基因(exbB,exbD,fimA,fur,hgbA,hsf2,nanB,ompH,ptfA,oma87,ompA,plpB,tonB,psl,sodA,sodC,tbpA)检出率高达100%,toxA的检出率为0%;9株Pm全部检出β-内酰胺类blaTEM基因,部分菌株检出strA,sul2,strB耐药基因;分离株均显示不同程度的致病性,4株毒力较强的菌株对小鼠LD50值分别为Pm8菌株为100.614.614 CFU,Pm12菌株为100.629 CFU,Pm13菌株为100.547 CFU,Pm122菌株为100.505CFU。(3)抗体水平检测结果:4株Pm菌苗在首次免疫小鼠后的第一周、第二周抗体水平缓慢上升,这两周抗体水平较低,抗体效价多为1:80,二免后的一周血清效价到达较高水平,效价为1:3201:640,其中Pm8,Pm12在二免后的一周血清抗体效价较高,达到1:640。免疫攻毒保护试验结果:在Pm攻毒后的14d菌苗对小鼠保护率分别为Pm12为80%,Pm122为56%,Pm8为66%,Pm13为40%;从免疫攻毒保护试验攻毒死亡小鼠肝脏中均分离出了相应的Pm。结论:从新疆北疆部分地区规模化牛场疑似病例中分离的Pm主要血清型为A:L3:ST1型,并初步筛选出了1株毒力强且具有良好抗原性的菌苗候选株,为进一步研发Pm菌苗奠定了基础。
其他文献
立秋过后,又是冰箱病的高发季节。不少人因为直接食用从冰箱里取出的饮料和食物,频频引发胃肠炎等急性病。秋季腹泻大多数是病毒污染所致,与一般饮食不洁引起的肠炎不同。经过炎
我国教师资格考试制度的实行对我国高校师范或非师范专业学生提出了新的要求,对高校体育教育专业的学生来说是一种新的挑战。本文在教师资格证考试制度的要求背景下,根据体育
羰基化合物是大气中一类重要痕量挥发性有机物,它们在大气光化学反应中起到重要作用。环境大气中羰基化合物的污染水平已成为评价一个城市环境质量的重要指标,对控制此类污染
第一次接触电脑就了解到了安装杀毒软件的重要性。随着互联网、云计算与移动互联网等领域的迅速发展,越来越多的重要信息被绑定在网络世界。
<正> 人工授精可以提高优良公猪的利用率,减少疾病的传播,同时节省人力、物力、财力,提高经济效益,因而目前越来越多的集约化养猪场采用人工授精的方式来提高生产水平。但若
<正> 生姜泡菜风味独特,口感上乘,不仅可以改变生姜的佐料地位,而且可以具有开脾健胃、防感冒、御寒等一些医疗作用,适合市场需求。其工艺流程: 原料→挑选→清洗→沥干→盐
智能优化算法是近年来信息科学和计算机等领域的研究热点之一。如何提高该类算法在复杂环境中的搜索性能是该领域的关键问题和研究热点。粒子群算法(Particle Swarm Optimization,PSO)是一种智能优化算法。与其它优化算法相比,粒子群算法参数少、操作简单、容易实现。这些优点使它受到了许多学者的关注。目前粒子群算法已经广泛应用于模糊控制、车辆路径调度、模式识别、产品运营、广告优化、供应
核转录因子NF-κB调控多种细胞学过程,包括细胞增殖、分化和凋亡等,特别在免疫和炎症反应中起关键的调控作用。泛素连接酶TRAF6分子是NF-κB通路中关键的接头分子,通过介导TN
西瓜嫁接栽培是克服连作障碍和防止西瓜枯萎病的特效技术措施,但生产中由于技术缺乏、管理不当造成嫁接效益差,甚至嫁接的还比不上未嫁接的西瓜。为了发挥嫁接栽培高抗枯萎病
我乡2000年引进台湾农友公司新育成的金姑娘、玉露厚皮洋香瓜良种试种,获得成功。据试验结果表明,这二个洋香瓜品种具有果大(平均单果重1—1.5公斤),汁多、质优(固形物含量达