细胞凋亡时细胞膜会发生一系列的变化。在早期阶段，磷脂层的不对称性分布的特性发生了破坏，表现为正常情况下位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）翻转到细胞膜的表面。因此，我们可以通过测定抗凝剂乳粘素(lactadherin)和膜联蛋白(annexin V)结合细胞的能力来检测凋亡。使用半抗原（例如FITC或生物素）标记膜联蛋白的方法可以用来检测凋亡的发生，这种方法被广泛应用于检测各种凋亡细胞。膜联蛋白结合到膜上是一个复杂的过程，不仅与游离的膜联蛋白和周围的钙离子浓度有关，而且还与细胞膜表面PS和脑磷脂(phosphatidylethanolamine，PE)的浓度相关。　　 乳粘素是一种黏附在乳汁脂肪小球膜表面的镶嵌型外周蛋白，在体外是一种潜在的抗凝剂，能够竞争性抑制凝血因子与磷脂的结合位点，而且它可以用来检测细胞凋亡时在细胞膜表面PS的表达。理论上讲，由于乳粘素检测有不依赖于钙离子的特性，它应该比膜联蛋白更适合于体内PS表达的测定。　　 先前的研究中已证实，细胞凋亡时会出现PS暴露，这是个缓慢的、逐渐的过程，使用荧光标记的乳粘素能够比膜联蛋白更早的检测出悬浮细胞系中PS的暴露。但是，检测贴壁细胞凋亡相关的PS暴露目前面临着样本处理导致的PS暴露这个问题。由于在收集细胞的过程中可能会出现细胞膜的特异性损伤，因而会导致假阳性结果的出现。所以我们利用贴壁的细胞系（人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系、人腺样囊性癌ACC-2细胞系）凋亡为条件，以确定PS探针检测方法的可靠性。　　 目的 细胞凋亡过程中磷脂酰丝氨酸会发生膜外转，在对悬浮细胞凋亡检测过程中荧光标记乳粘素能够早于膜联蛋白检测到PS的外转。本文旨在研究贴壁细胞由于收集过程中可能造成的细胞膜损伤是否会影响到本方法的准确性。　　 方法：舌癌细胞系Tca8113和腺样囊性癌细胞系ACC-2以三氧化二砷诱导凋亡。用改良方法收集凋亡细胞并用乳粘素和/或膜联蛋白标记。在不同的时间段以共聚焦显微镜和流式细胞仪检测。　　 结果：不含胰酶的收集方法没有造成细胞膜的明显损伤。结果显示在细胞凋亡过程中PS翻转可以分为三个阶段，荧光标记乳粘素能够检测到早期的PS暴露。两种不同的细胞系具有相似的PS暴露模式提示这一模式普遍存在于贴壁细胞系中。　　 结论：应用合适的细胞收集方式，乳粘素和膜联蛋白都可以检测贴壁细胞的凋亡。由于凋亡细胞浓缩胞膜和出泡表面的物理结构使得乳粘素更加易于与PS的结合，乳粘素检测细胞凋亡时比膜联蛋白更加敏感。