论文部分内容阅读
目的:从日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA中扩增出日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)和日本血吸虫26kDa谷胱甘肽-S-转移酶(SjGST)编码基因,扩增小鼠白介素-12(mIL-12)编码序列,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),并验证其能表达出重组蛋白;利用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,观察其对小鼠抗血吸虫感染的保护作用,以及对特异性IgG抗体、脾细胞分泌的细胞因子及CD4+和CD8+比率的影响。 方法:提取日本血吸虫成虫总RNA,纯化出mRNA,逆转录生成cDNA,以其为模板扩增出Sj14-3-3和SjGST编码基因,另从带mIL-12的质粒(pSEC:p30-p40)扩增出mIL-12编码基因,将扩增产物克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)。用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blotting等方法验证其在体外(COS-7细胞)表达,制备无内毒素小鼠DNA疫苗,准备免疫小鼠。 BABC/c小鼠(6-8周龄,体重18-22g)随机分成5组,每组5只,雌雄兼用。除对照组外,每组均给予日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3.1(+)-Sj14-3-3 20μg/次/鼠,后腿肌肉注射(i.m.),共免疫2次,