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血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)具有诱导肿瘤中淋巴管生成和促进肿瘤淋巴转移的功能,是潜在的治疗肿瘤分子靶标。可溶性血小板源性生长因子受体(sPDGFR)可与细胞膜表面的PDGFR竞争性结合PDGF,从而阻断PDGF的生物学效应,有望用于肿瘤的治疗。由于天然的sPDGFR存在着半衰期短、与配体结合能力低等缺点,本研究利用基因工程技术,构建PDGFR的β链膜外区与人IgGFc片段的融合蛋白sPDGFRβ/Fc。该重组型可溶性受体作为一种新型的PDGF拮抗剂,具有很好的应用前景。 本研究采用Bac-to-Bac系统,构建重组质粒pFastbac-sPDGFRβ/Fc,转化感受态细胞DH10Bac,使目的基因与杆状病毒基因组DNA发生位点特异性重组,得到rBacmid-sPDGFRβ/Fc重组病毒DNA。该重组病毒DNA通过脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得了具有感染能力的重组病毒粒子。进一步将重组病毒粒子感染Sf9无血清细胞系,获得了目的蛋白sPDGFRβ/Fc的高表达,表达量为1mg/L。经protein A亲和层析,纯度达75%以上,MTT法检测表明sPDGFRβ/Fc具有抑制PDGF的刺激3T3细胞增殖的能力。此外,本研究还建立了Sf9的无血清悬浮培养系统,发现无论是贴壁还是悬浮培养,补加葡萄糖均可有效地促进细胞生长,提高细胞培养密度。 本研究利用杆状病毒表达载体系统(baculovirus expression vectors system BEVS)成功构建重组病毒,为大规模表达、纯化具有生物活性的PDGFRβ/Fc用于肿瘤的治疗奠定了基础。