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背景与目的结直肠癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率分别位居全世界恶性肿瘤的第3位和第4位,因此,探讨结直肠癌的发病机制、寻找结直肠癌的防治方法,是目前亟待解决的问题。结直肠癌的发生是多种因素共同作用的结果,其发生发展与基因改变有着密切的关系,DNA甲基化是肿瘤发生的一个重要表观遗传学机制,通过使抑癌基因失活参与肿瘤的发生过程。DAPK基因是一种细胞凋亡的正性调节基因,编码一类新型钙离子／钙调素依赖激酶,可被Fas、E2F、P53、P16,神经酰胺等多种因子激活而参与细胞凋亡过程。FHIT基因的编码蛋白具有三腺苷三磷酸(AP3A)水解酶的活性,通过调控细胞周期和诱导细胞凋亡抑制肿瘤的发生。研究证实DAPK和FHIT基因在多种肿瘤中表达下调,是公认的抑癌基因,但关于联合检测两基因甲基化水平的研究在国内外罕见报道。本实验采用甲基化特异性PCR检测46例结直肠癌及46例正常结直肠组织中DAPK和FHIT基因的甲基化状态,以期探讨两基因异常甲基化在结直肠癌发生发展、转移中的作用以及与临床病理特征的关系。方法1.甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)本实验采用该方法检测结直肠癌组织及正常结直肠组织各46例中DAPK、FHIT基因启动子区的甲基化水平,并分析两基因甲基化水平与性别、年龄、分化程度、肿瘤部位、淋巴结转移、临床分期之间的关系以及DAPK和FHIT基因甲基化水平的相关性。2.统计学处理利用SPSS17.0统计软件对相关数据进行分析,统计学方法采用χ2检验和spearman关联分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果1. DAPK基因在结直肠癌组织和正常结直肠组织中的甲基化率分别为60.87%、13.04%,差异有统计学意义(χ2=22.58,P<0.05)；其甲基化水平与分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤部位及临床分期无明显相关性(P>0.05)。2. FHIT基因在结直肠癌组织和正常结直肠组织中的甲基化率分别为54.35%、8.69%,差异有统计学意义(χ2=22.21,P<0.05)；其甲基化水平与分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤部位及临床分期无明显相关性(P>0.05)。3.统计学分析显示：结直肠癌DAPK和FHIT基因甲基化发生率呈正相关(r=0.393,P<0.05)。结论1.结直肠癌中DAPK、FHIT基因甲基化率明显高于正常结直肠组织,且与分化程度、淋巴结转移显著相关,表明DAPK、FHIT基因甲基化可能参与了结直肠癌的发生发展和转移过程。2. DAPK和FHIT基因在结直肠癌中的甲基化水平呈正相关,提示两基因可能在结直肠癌的发生发展中起协同作用,因此联合检测DAPK和FHIT基因甲基化水平对结直肠癌的诊断和预后判断有重要价值。