打顶抹芽是优质烤烟种植过程中一项重要的生产技术措施。烟草在一定的生长时期必须打顶，而打顶后会萌生大量的侧芽。侧芽耗费营养，会降低烟叶的品质和产量，因此必须抹掉侧芽。人工抹芽耗费人力和物力，提高了烟叶生产成本。打顶后施用化学药剂可抑制腋芽生长，降低了烟叶生产劳动强度。但化学药剂需要成本，且会造成环境污染。用基因工程方法创建无侧芽的烟草，则有可能从根本上解决上述问题。 陈兴江(2005)根据番茄LS基因进行同源克隆了烟草TLS基因的部分片段749bp，与番茄的LS氨基酸序列同源性达92％，利用伤诱导启动子构建的TLS基因的RNAi载体并转化烟草，可能因TLS基因在愈伤组织中的表达受到抑制而无法得到再生芽. 本研究通过间接诱导途径对其方案进行完善，首先从pOpOn2.1载体克隆了转录因子LhG4，构建了一个组成型的花椰菜花叶病毒35S启动子表达转录因子LhG4的表达载体，同时构建了一个LhG4能识别结合的pOp6启动子的RNAi-TLS表达载体：由于陈兴江所构建载体的酶切位点无法与pOpOffl的多克隆位点匹配，所以先根据已知序列扩增了TLS基因，通过Gateway技术，BP、LR反应后将其最终克隆到pOpOffl载体上，构建了.POP6启动子的TLS的RNAi载体。然后将这两个载体分别进行烟草转化。转基因成功后将这两个转基因材料进行人工授粉杂交，其F1即有望获得无侧芽烟草。目前，利用这两个载体转化烟草的部分工作已经进入壮苗培养阶段。 我们拟利用伤诱导基因AOS的启动子替换组成型的花椰菜花叶病毒35S启动子，伤诱导启动TLS的RNAi的表达，因此本研究对AOS启动子的部分序列进行了克隆，并对其启动子结构进行了分析。此外还成功克隆了TLS基因5’端序列。这为进一步开展本研究奠定了良好基础。