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光化学疗法通过光敏剂与紫外光或可见光相结合发挥协同细胞毒性,常用于包括皮肤癌在内的皮肤性疾病的治疗。虽然这种协同作用具有较高的致突变性和无选择性,却为实现肿瘤的高效、高靶向、低毒副的理想治疗提供了可能。4-硫-5-(2-噻吩)尿嘧啶核苷酸(4-thio-5-(2-thienyl)uridine,S4T5U)作为一种新合成的近紫外UVA的光敏剂,目前在近紫外UVA辅助下的抗肿瘤活性研究还未见报道。目的:探究新化合物4-硫-5-(2-噻吩)尿嘧啶核苷酸在近紫外UVA的辅助下,体外抑制人黑色素瘤A375细胞增殖的作用机制。方法:利用MTT法对4-硫-5-(2-噻吩)尿苷和近紫外UVA的协同作用剂量进行筛选;采用Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测方法和流式细胞术分别进行协同作用下的形态学分析、细胞周期检测和凋亡检测,对协同作用引起的细胞死亡类型做以定性判断;通过蛋白免疫印记法,对部分关键蛋白如p38、Akt、Bcl-2家族蛋白、caspase家族蛋白和PARP等定量检测,分析信号传递途径;最后再利用高效液相色谱,对4-硫-5-(2-噻吩)尿苷在UVA辐射下的体外结构变化进行检测分析,判断可能的光反应过程。结果:无毒剂量的4-硫-5-(2-噻吩)尿苷(100μmol/L)在无害剂量的UVA(15 KJ/m2)辅助下,能够引起A375细胞的广泛性死亡;形态学分析和流式细胞术检测结果显示:两者可通过协同作用诱导A375细胞凋亡性细胞死亡;免疫印记法显示:两者的协同作用能够抑制p38蛋白的表达及磷酸化,从而抑制细胞的增殖,同时也降低Akt表达及磷酸化和抗凋亡蛋白Bcl-2表达,减弱对促凋亡蛋白Bad的抑制,进一步放大凋亡信号,促使pro-caspase-9和pro-caspase-3的活化和剪切,激活claved-PARP,执行细胞凋亡;高效液相色谱分析显示:4-硫-5-(2-噻吩)尿苷在低剂量的UVA(15 KJ/m2)辅助下,能够发生脱噻吩基的反应。随着UVA剂量的增加,会进一步发生脱硫甚至成环反应。结论:无毒剂量的4-硫-5-(2-噻吩)尿苷(100μmol/L)在无害剂量的UVA(15 KJ/m2)辅助下,可能通过光化学反应,抑制A375细胞p38的表达和Akt信号通路,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。