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肺癌是全球发病率最高的恶性肿瘤之一,在我国,肺癌的发病率和死亡率占恶性肿瘤首位。目前临床上主要治疗早期肺癌的手段是手术和放化疗,但由于肺癌早期缺乏特异性症状,使得大部分患者发现时已经处于肺癌晚期,因此错过了手术的最佳期,而接受手术的患者也面临术后后遗症和恢复的问题。随着现时代医药技术的发展,表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（例如:吉非替尼）的出现使肺癌患者看到了希望,但是遗憾的是,患者在使用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（吉非替尼）8-10个月之后,都不可避免地出现了耐药的现象。现阶段肺癌治疗的现状急需一个突破口。中药具有多靶点,副作用小,安全性高,不易耐药等优点,所以中药复方联合手术、西药的治疗方式越来越多地被应用到临床上。本论文在体内与体外两方面考察对金复康优化方（ALG-X-012）联合吉非替尼对耐药型H1975细胞的影响进行讨论与研究,从而为中药复方进一步的开发提供依据和基础,为非小细胞肺癌患者提供更多更好的联合治疗方案的选择。1.吉非替尼耐药细胞株的选择依据由于分子靶向药物吉非替尼在患者使用一段时间后,机体对吉非替尼产生耐药,使得治疗效果不佳。吉非替尼耐药分为两种,一种是原发性耐药,一种是获得性耐药。原发性耐药即患者对首次使用EGFR-TKI治疗无反应,在症状改善、控制病灶和生存时间等方面未获得明显益处;获得性耐药是指既往接受过连续至少30天的EGFR-TKI单药治疗,对EGFR-TKI治疗有明显临床效益并且具有与药物敏感性相关的EGFR基因突变。由于大多数患者在使用EGFR-TKI治疗后的8～12月内仍会出现病情进展,从而获得继发性耐药,所以有必要研究导致获得性耐药的原因,为耐药后的进一步治疗提供理论依据。导致获得性耐药的主要原因是EGFR基因20外显子790的突变,即T790M突变,这种T790M突变占所有耐药机制的50%。非小细胞肺癌细胞H1975含有T790M和L858R双突变,作为由T790M突变导致的EGFR-TKI获得性耐药研究模型得到广泛应用。研究发现与敏感株PC9细胞相比,H1975细胞株不仅有19外显子缺失,还有20外显子的缺失,其mi RNA的表达特征明显,H1975细胞对吉非替尼的耐药性为PC9细胞的100倍以上。所以使用吉非替尼耐药H1975细胞作为研究对象是合理的。2.金复康优化方（ALG-X-012）联合吉非替尼体外抗肿瘤作用研究本文章考察金复康优化方（ALG-X-012）联合吉非替尼对非小细胞肺癌H1975的增殖影响,探究其可能的作用机制。通过MTT法、划痕实验、流式细胞术实验考察金复康优化方（ALG-X-012）、吉非替尼单独用药以及两者联合用药对H1975细胞的增殖抑制、细胞迁移、凋亡与周期的影响;通过Western blot法检测吉非替尼与金复康优化方单独给药与及联合用药对EGFR-PI3k-AKT信号通路的有关蛋白p-EGFR,p-AKT,p-mTOR表达,探究可能的作用机制。结果显示:金复康优化方ALG-X-012与吉非替尼联合用药时,比单独给药组可显著抑制H1975细胞的增殖,阻碍H1975细胞的迁移,并且诱导细胞凋亡,将细胞阻滞在G1期。吉非替尼给药组与优化方ALG-X-012给药组对p-EGFR,p-AKT,p-mTOR蛋白的表达与空白对照组相比,并无明显差异,而联合给药组比较于空白对照组,对p-EGFR,p-AKT,p-mTOR蛋白有显著下调。提示其抗肿瘤活性的机制可能与下调p-EGFR,p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平,从而阻断EGFR-PI3k-AKT信号通路有关。3.金复康优化方（ALG-X-012）联合吉非替尼体内抗肿瘤作用研究构建BALB/c裸鼠H1975细胞肺癌模型,通过分组给药考察金复康优化方（ALG-X-012）联合吉非替尼非小细胞肺癌H1975肿瘤的影响,并通过HE染色,免疫组织化学分析法实验和蛋白质印迹法来检测肿瘤的上皮间充质转化EMT标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达以及EGFR-PI3k-AKT信号通路的耐药相关蛋白p-EGFR、PTEN、p-Met和p-mTOR的表达并探讨其可能的作用机制。结果显示:金复康优化方（ALG-X-012）组联合吉非替尼组比较与模型组、单独给药组以及金复康联合吉非替尼组,其肿瘤体积更小,扣瘤率较高并且裸荷瘤裸鼠的脾脏指数较高,提示金复康优化方组联合吉非替尼组能够增强荷瘤裸鼠的免疫能力。从肝脏组织切片看,金复康优化方组联合吉非替尼组比较于其他单独用药组,少见灶性坏死,中间带,或小叶中心型,伴少或无炎细胞浸润。除阳性药组外,金复康优化方组联合吉非替尼组比较于其他组别显著上调E-cadherin和PTEN的表达水平,下调N-cadherin、Vimentin、p-Met、p-mTOR以及p-EGFR的表达水平,提示金复康优化方ALG-X-012联合吉非替尼抑制肿瘤生长和发展的机制可能与抑制EMT活化和阻断EGFR-PI3k-AKT信号通路有关。4.结论金复康优化方ALG-X-012联合吉非替尼,不论是对细胞层面还是在动物层面上而言,对耐吉非替尼H1975非小细胞肺癌的治疗都有改善作用,这也说明中药联合西药的治疗方案可以减少或改变西药耐药的情况。在今后治疗过程中,不仅在肿瘤治疗领域,在其他疾病治疗领域都应该提倡中西结合的治疗方针,促进中药事业发展。