论文部分内容阅读
前言原发性肝癌是指自肝细胞或肝内胆管细胞发生的肿瘤。原发性肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,其死亡率在消化系统恶性肿瘤中居第三位,仅次于胃癌和食管癌。其发病率有上升趋势,全世界每年均约有25万人死于肝癌,而我国占其中的45%。本病多见于中年男性,男女之比为2-5∶1。而且原发性肝癌的发病率有明显的地域性,亚洲男性发病率明显高于北欧和北美。国内沿海高于内地,东南和东北发病率较高。原发性肝癌是指肝脏上皮的恶性肿瘤,一般包括肝细胞性肝癌、胆管细胞癌和混合细胞癌。由于原发性肝癌在人群中的普遍性和其对人体的危害之深,对原发性肝癌的发生和发展及其防治方面的研究近年来也倍受学者们的关注。DNA修复系统是机体内主要的防御屏障,参与修复由内外环境因素所致的DNA损伤。DNA修复基因的多态性可能是导致DNA损伤修复能力存在个体差异及增加肿瘤易感性的主要原因之一。XPD是编码NER过程中相关蛋白的七种遗传互补基因之一。XPD基因产物是转录修复因子TFIIH复合物中一种高度保守的ATP依赖性解旋酶,在NER及转录过程中发挥双重作用。XPD基因的突变能减少其复合物的活性。目前XPD多态的功能意义尚不十分清楚,可能是影响其蛋白的合成,从而影响后者与p44(TFIIH的另一个亚单位)的交互作用,降低了解旋酶活性,NER功能缺陷,导致DNA修复能力下降而增加了癌症发生易感性。本实验通过检测肝癌患者及正常对照XPD遗传多态性,了解原发性肝癌的发生与XPD多态性有关,探讨DNA修复基因XPD多态性和原发性肝癌易感性的关系。材料和方法病例为辽宁地区94例原发性肝癌实验组以及111例正常对照组。所有患者采血前均未进行过化放疗。对照组按年龄和性别与病例频数按1∶1匹配。在收集血液标本的同时,收集每个研究对象的人口学资料。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,检测XPD基因Lys751Gln多态基因型。采用碘化钾方法从抗凝血中提取基因DNA。PCR扩增XPD-751多态。各基因设计引物如下:XPD751:5′-GCCCGCTCTGGATTATACG-3′和5′-CTATCATCTCCTGGCCCCC-3′。PCR反应:XPD-751、RCC1-194和XRCC1-399。反应条件为94℃预变性2min,然后94℃30秒、57℃30秒、72℃45秒,30个循环后,72℃终延伸7min。XRCC1280将30个循环中的57℃改为59℃,其余条件同上。电泳分析PCR产物。对PCR产物进行酶切,XPD-751基因对应的内切酶为PstⅠ。取PCR产物5μl与相应的限制性核酸内切酶于37℃水浴过夜,用1.5%琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物。以X~2检验比较XPD-751多态基因型在病例与对照之间分布的差异。采用Logistic检测XPD-751多态基因型与肝癌发生危险度的关系。所用统计软件为SPSS16.0。结果1、94例肝癌患者XPD751基因Lys/Lys,Lys/Gln,Gln/Gln多态基因型频率分别为69(73.4%),24(25.5%)和1(1.1%),而111例健康对照组分别为97(87.4%)、14(12.6%)和0(0%);两组间比较有非常显著的差异(p=0.011)。2、经Logistic回归分析发现携带至少1个751 Gln等位基因(Lys/Gln和Gln/Gln基因型)的个体患肝癌的危险显著增高(OR=2.51,95%CI为1.22-5.181,p=0.011)。结论XPD-751位点基因多态性与原发性肝癌的发生有一定的相关,XPD基因Lys751Gln多态性是原发性肝癌的遗传易感因素。