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研究目的以食管鳞癌不同衍变阶段的患者为研究对象,观察氧化低密度脂蛋白（oxLDL）与食管鳞癌是否存在关联;如果存在关联,利用体外细胞培养实验探讨其可能的作用机理。研究内容和方法一. oxLDL与食管癌衍变阶段的关联性研究1.研究对象肥城市食管病变碘染色内镜筛检及病理活检确诊的食管鳞状上皮细胞正常33例,食管基底细胞增生37例,食管鳞状细胞不典型增生47例,食管鳞状细胞癌（ESCC）43例。2.血脂指标测定血清总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）水平采用酶比色法测定;血清白蛋白以溴甲酚绿（BCG）法测定;oxLDL、oxLDL抗体（oxLDL-Ab）、oxLDL抗体lgG亚型（oxLDL-lgG）和lgM亚型（oxLDL-lgM）水平采用酶联免疫吸附（ELISA）方法测定。3.统计方法应用SPSS15.0统计软件进行单因素分析或多项式Logistic回归分析,P<0.05认为差异有统计学意义。二. oxLDL对人食管癌细胞株Eca109增殖的影响及机理探讨1.甲基四唑蓝（MTT）比色法检测oxLDL及抗体成分对Eca109细胞株的增殖抑制率,oxLDL对阿霉素（ADM）所致Eca109细胞增殖抑制的影响。2.细胞凋亡指标的测定:吉姆萨染色光镜下观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期改变。3. RT-PCR和Western blot检测oxLDL及其与ADM联合对细胞凋亡相关基因及蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平的影响。结果一. oxLDL与食管癌衍变阶段的关联性研究1.单因素分析显示:食管癌衍变阶段四组中,年龄、血清白蛋白、TC、HDL、LDL、oxLDL、oxLDL-Ab、oxLDL-lgG和oxLDL-lgM水平差异有显著性,而其它因素差异没有统计学意义。2.随着食管组织病变加重,血清oxLDL、oxLDL-Ab、oxLDL-lgG水平趋向降低,而oxLDL-lgM水平趋向上升。调整年龄、TC、LDL、HDL和血清白蛋白等混杂因素后,四组间oxLDL和oxLDL-lgM水平仍有显著性差异;而血清oxLDL-Ab和oxLDL-lgG水平无显著性差异。3.食管癌衍变阶段与血清oxLDL、oxLDL-Ab、oxLDL-lgG水平呈显著负相关,而与oxLDL-lgM水平呈显著正相关。4.调整年龄、TC、LDL、HDL和血清白蛋白等混杂因素后,oxLDL值增加对食管癌有保护作用（OR=0.94,95%CI:0.89-0.99）;而oxLDL-lgM增加不典型增生和食管癌的危险性,OR分别为1.11（95%CI:1.01-1.23）和1.18（95%CI:1.06-1.31）。二. oxLDL对人食管癌细胞株Eca109增殖的影响及机理探讨1.对细胞增殖的影响1.1随着oxLDL浓度的增加和作用时间的延长,Ecal09细胞的存活率降低,且呈剂量-时间效应依赖关系。1.2 oxLDL-Ab及oxLDL-R-Ab对Eca109细胞的活性基本无影响;oxLDL-Ab对oxLDL所致的细胞活性抑制无显著作用;而oxLDL-R-Ab可明显减少oxLDL所致的细胞活性抑制作用（抑制率从27.73%降到7.31%,P<0.05）。1.3随着ADM浓度的增加和作用时间的延长,Ecal09细胞的存活率降低,且呈剂量-时间效应依赖关系。1.4 oxLDL可明显增强ADM所致的细胞活性抑制（抑制率由ADM组的28.35%增至43.97%,P<0.05）,两因素存在协同作用。2.对细胞凋亡的影响2.1 oxLDL及ADM使Ecal09细胞出现凋亡形态改变,可见凋亡小体甚至核崩解。2.2随着oxLDL浓度的增加和作用时间的延长,Eca109细胞的凋亡率升高,有明显的量效和时效依赖关系。2.3 oxLDL-Ab对oxLDL所致的细胞凋亡率无显著作用;oxLDL-R-Ab可减低oxLDL所致的细胞凋亡（凋亡率从15.11%降到12.58%,P<0.05）。2.4 oxLDL可使ADM诱导Ecal09细胞的凋亡率由11.27%增至19.79%,P<0.05,主效应及其交互作用都显著,两因素存在协同作用。3.对细胞周期的影响3.1随着oxLDL浓度的增加,Ecal09细胞周期的S期和G2/M期比例逐渐增加,G0/G1期比例逐渐减少,出现S期阻滞。3.2 oxLDL-Ab和oxLDL-R-Ab基本不能改变细胞周期分布,oxLDL-Ab对oxLDL引起的细胞周期改变无影响;而oxLDL-R-Ab使oxLDL对细胞的S期阻滞作用降低（由29.86%降至24.97%,P<0.05）。3.3 oxLDL和ADM单独作用使细胞的S期比例升高（由对照组的22.03%分别上升至29.86%和62.59%,P<0.05）,出现S期阻滞;oxLDL与ADM联合使细胞的G2/M期比例增至75.66%,P<0.05,细胞周期阻滞于G2/M期。4.对细胞凋亡相关基因和蛋白表达的影响oxLDL显著降低Eca109细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平,升高Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平,并使Bcl-2/Bax比值降低。oxLDL和ADM联合使Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平较单独作用组明显降低,而Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著升高。结论1.随着食管黏膜上皮细胞由正常到基底细胞增生到不典型增生再到食管鳞状细胞癌病变的加重,oxLDL及oxLDL-Ab水平呈下降趋势,与食管癌的发生呈负相关;而oxLDL-lgM亚型抗体水平呈上升趋势,与食管癌的发生呈正相关。2. oxLDL具有明显的细胞毒性作用,能抑制食管癌细胞的增殖,出现细胞凋亡的特征改变。oxLDL能显著降低细胞凋亡相关的Bcl-2基因和蛋白表达水平,升高Bax和Caspase-3基因和蛋白表达水平。3. oxLDL-Ab及oxLDL-R-Ab单独应用对食管癌细胞增殖基本无影响;而oxLDL-R-Ab能部分减低oxLDL的细胞毒性作用。4. oxLDL与ADM对食管癌细胞毒性有协同作用。