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反刍动物尿中嘌呤衍生物(PD,purine derivatives)包括尿囊素、尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤,它们被广泛应用估测瘤胃微生物蛋白(MCP)供给。Chen等认为动物尿中PD与肌酸苷的比值能作为测定反刍动物MCP的一个指标。目前定量测定动物尿中PD和肌酸苷主要有两种方法:比色法和高效液相色谱法(HPLC)。本研究建立了一种同时测定动物尿中PD和肌酸苷的HPLC方法。色谱条件:采用Varian Prostar 210型高效液相色谱仪配有Prostar二极管阵列检测器, Prostar 210色谱泵。以Varian C18柱(5μm ,250mm×4.6 mm I.D.)为分析柱,Varian A0495-MG 9771837为保护柱;以25mmol/ l KH2PO4(pH=4.7)为流动相,流速1.0 ml/ min;进样量:20μl;检测波长:220nm;柱温:25℃。实现了对动物尿样中PD和肌酸苷的分离与测定。标准储备液的配置:尿囊素300μmol、肌酸酐100μmol标准品溶解于40ml超纯水中;准确称取尿酸100μmol、黄嘌呤50μmol、次黄嘌呤50μmol标准品溶解于40ml热碱溶液(pH>10,KOH溶液80℃),待标样完全溶解,用0.01mol/l KOH和0.01mol/l H3PO4调整pH=6;混合上述俩种溶液,用超纯水定容100ml,调整pH=6,配成混合标准储备液。由于尿囊素和肌酸苷具有极其相似的分子极性,用HPLC分离动物尿中的这两种物质时,其色谱峰很容易发生重叠,给测定带来困难。在本试验条件下,尿中尿囊素和肌酸苷的色谱峰能够得到有效的分离。标准品中尿囊素、肌酸苷、尿酸、次黄嘌呤和黄嘌呤,其保留时间分别为:2.78, 3.43, 4.97, 6.00, 6.73min。标准品中物质的浓度和峰面积呈很好的线性相关,加标回收率为96-102%,日内日间精密度测定在2.8-4.3%之间;在信噪比S/N=3的条件下,尿囊素、肌酸苷、尿酸、次黄嘌呤和黄嘌呤的最低检测限分别为0.6μmol/l、0.1μmol/l、0.2μmol/l、0.1μmol/l和0.1μmol/l。本试验方法能够有效的分离尿囊素和肌酸苷,达到同时测定反刍动物尿中的PD和肌酸苷的目的。