论文部分内容阅读
目的:本课题通过孤独症大鼠动物模型的建立,检测Notch信号通路关键因子发状分裂相关增强子5(hairy and enhancer of split 5,HES5)和星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经细胞标记物β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ,TUBB3)在孤独症动物模型前额叶皮质及海马的表达水平,探讨Notch信号通路在孤独症发病机制中的作用。方法:1.健康繁殖期Wistar雌鼠20只,体重250-260g,随机选取15只在妊娠12.5天(E12.5)腹腔注射丙戊酸钠(sodium valproate,VPA),其子代为孤独症模型组;其余5只则注射等量生理盐水,子代为正常对照组。通过比较三箱实验、自梳理实验等行为学检测验证模型建立是否成功。2.通过蛋白免疫印迹实验(Western blotting)方法,对比孤独症大鼠模型组与正常对照组出生后42天(P42)前额叶皮质及海马HES5、GFAP及TUBB3的表达水平变化;通过免疫组织化学方法了解出生后42天孤独症模型组及正常对照组大鼠前额叶皮质及海马GFAP及TUBB3的表达水平。结果:1.成功建立孤独症动物模型:与正常对照组比较,三箱实验显示模型组大鼠交互能力障碍、缺乏对新鲜事物的偏好性;自梳理实验显示模型组理毛时间显著增加(P<0.05);2.Western blot结果显示:与正常对照组比较,模型组大鼠P42前额叶皮质中HES5表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),GFAP表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),TUBB3的表达差异无统计学意义;与正常对照组比较,模型组大鼠P42海马中TUBB3的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),HES5和GFAP的表达差异无统计学意义。3.免疫组织化学结果显示:P42时GFAP在模型组和正常对照组大鼠前额叶皮质及海马区均有表达,前额叶皮质中模型组GFAP的表达高于正常对照组(P<0.05),海马中GFAP的表达差异无统计学意义;P42时TUBB3在模型组和对照组大鼠前额叶皮质及海马区均有表达,模型组海马中TUBB3的表达低于正常对照组(P<0.05),P42时TUBB3在前额叶皮质中的表达差异无统计学意义。结论:1.VPA母孕期化学干预法建立的孤独症大鼠模型,行为学改变与ASD诊断标准中的核心症状相符,是一种可靠的孤独症动物模型。2.孤独症大鼠模型前额叶皮质星形胶质细胞的增多,可能参与孤独症样行为学改变的发生。3.孤独症大鼠模型前额叶皮质星形胶质细胞的增多可能与Notch信号通路活化水平上调有关。