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FoxO6转录因子属于FoxO转录家族（FoxO1，FoxO3a，FoxO4，FoxO6）的一员。在多种细胞类型中，FoxO转录因子家族在细胞周期、阻滞作用、抗氧化应激、细胞生存、能量代谢、细胞死亡等过程中发挥重要。并且已有研究发现：FoxO6转录因子与PGC-1α启动子共同调控肌细胞的氧化代谢过程。肌肉生长抑制素（Myostatin，MSTN），是动物肌肉生长发育过程中一个重要的负调控主效基因，能调控肌肉生长、动物脂肪的沉积和骨骼的生长发育，还能影响肌键和韧带的强硬度。根据本课题组前期实验结果得知：MSTN启动子上有FoxO家族的结合位点。因此，本实验开展FoxO6转录因子基因CDS区的克隆、真核表达载体和原核真核表达的构建以及MSTN基因真核表达载体的构建，FoxO6转录因子对MSTN启动子启动活性的影响，研究FoxO6转录因子与MSTN启动子相互作用，以期解析牛FoxO6转录因子调控成肌细胞和脂肪细胞的增殖与分化，参与骨骼肌代谢等方面的机制。 本研究选择贵州关岭黄牛作为实验对象，根据GenBank中牛Foxo6、MSTN基因序列设计PCR引物，采用PCR方法扩增关岭牛FoxO6的CDS区、MSTN基因启动子区，并构建pET32a(+)-FoxO6原核表达载体、pcDNA3.1(+)-FoxO6真核表达载体和pGL3-Basic-MSTN真核表达载体。将pET32a(+)-FoxO6原核表达载体转化原核表达菌株BL21（DE3），诱导菌株表达FoxO6重组蛋白，初步探索FoxO6蛋白的表达条件；并将pcDNA3.1(+)-FoxO6真核表达载体和pGL3-Basic-MSTN真核表达载体共转染小鼠C2C12细胞系，检测其24h后的双荧光素酶活性，在细胞内验证FOxO6转录因子与MSTN启动子的相互作用。研究结果如下： （1）成功克隆FoxO6基因的CDS区，构建pET32a(+)-FoxO6原核表达载体、pcDNA3.1(+)-FoxO6真核表达载体，并将原核表达载体转化至原核表达菌株BL21(DE3)。 （2）成功克隆关岭牛MSTN基因的启动区，构建PGL3-Basic-MSTN真核表达载体。 （3）初步探索表达FoxO6蛋白的条件是：37℃,0.4mM终浓度的IPTG，6%甘氨酸，诱导时间为4h。 （4）双荧光素酶检测结果显示，在小鼠C2C12细胞中，FoxO6转录因子对MSTN启动子的活性具有抑制作用。