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促性腺激素释放激素(GnRH)是由10个氨基酸残基组成的小肽,具有弱的抗原性.为了提高它的免疫原性,该论文设计了两个以GnRH为基础的重组线性多肽:GnRH-hinge-MVP和GnRH3-hinge-MVP.它们都是由GnRH、人IgG的hinge region(225-232/225-232)和麻疹病毒融合蛋白中典型T表位片段串联在一起构成的新肽链结构.不同的是GnRH-hinge-MVP中N端为一段GnRH,而GnRH3-hinge-MVP多肽分子中为三段重复的GnRH.通过引物互补PCR及连续的加端PCR技术获得能表达这些肽的基因片段.接着把这两段多肽基因分别插入到含有门冬酰胺酶C端第199-326氨基酸残基片段的后面,形成融合蛋白,并预留酸水解位点(aspartyl-prolyl linker),构成表达载体pED-GnRH和pED-GnRH3.克隆的基因在大肠杆菌中高效表达,表达量可至30﹪左右,且形成了包涵体.融合蛋白经分离纯化后,酸水解以释放出目的蛋白.纯化的目的蛋白GnRH-hinge-MVP和GnRH3-hinge-MVP在通入氧气的情况下,发生氧化反应,由单链结构变成双链的二聚体结构.这些二聚化的重组多肽能诱导大鼠产生高滴度的抗GnRH抗体.而且抗体滴度与GnRH重复有关,三段重复的GnRH多肽诱导抗体滴度高于一段GnRH多肽.结果说明,确定的B表位与hinge region和T细胞表位联合组成的嵌合肽是一个很有效的抗原呈现系统.但是,它们诱导的免疫反应离不开福氏佐剂的刺激.众所周知,福氏佐剂有许多副作用,不能应用于临床试验和治疗.在进一步的实验中,我们把二聚化的GnRH3-hinge-MVP与HSP65交连在一起,交连物直接注入到提前预免疫的动物体内,结果在没有福氏佐剂的情况下,诱导了抗体的产生,并伴随着明显的药效作用.雌雄动物的生殖器官发育受阻,出现萎缩现象.病理切片显示,雄性动物的输精管萎缩,生精作用降低,精子量减少.雌性动物的子宫变小,基质中腺体减少,处于非活跃状态,卵巢中卵泡发育减退.可见对于一些涉及GnRH的疾病,偶联物GnRH3-hinge-MVP-Hsp可能具有很好疗效,而且还摆脱了福氏佐剂的协助,是名副其实的免佐剂疫苗.