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目的:穿通支原体(Mycoploamapenetrans,M.penetrans)是首次从艾滋病(AIDS)患者尿中分离检出的一种新的致病性支原体,继之,1999年Yánez从原发性抗磷脂综合征病人的体液中分离到穿通支原体。我们的研究曾发现在IgA肾病患者的血液、尿液、咽拭子及肿瘤病人的肿瘤组织和血液标本中M.penetrans有很高的分离率。本研究旨在研究分离自IgA肾病、肿瘤病人的穿通支原体体外药物敏感性。
方法:
1、MPe菌株的分离与鉴定:取经处理的IgA肾病的血液、尿液、咽拭子,肿瘤病人的肿瘤组织和血液标本用4种培养基对比培养,将产酸、变黄的可疑阳性培养物过滤、转种于MPe固体培养基,经培养3-4天后置光学显微镜下观察菌落,发现油煎蛋样菌落,与标准菌株对照,证实支原体生长,注意与L型细菌相鉴别。进一步应用生化反应试验、套式PCR和核酸序列测定等方法进行鉴定。
2.试验菌株的选定:随机抽取分离自肿瘤病人血液或肿瘤组织30株MPe(分离自膀胱移行细胞癌18株,胃癌10株,宫颈癌2株)以及分离自IgA肾病的血液、尿液、咽拭子的15株MPe进行药物敏感性试验。
3.Mpe菌株的复活:将冰冻保存于-20℃的MPe,接种于SP4液体培养基,置37℃孵育4~5天,培养基颜色变黄、澄清,并与已知MPe标准菌株(GTU-54-6Al)相比较确认后,收集菌株。
4.抗菌药物准备:抗菌药物稀释参照文献[6,7]操作。参照NCCLS操作方法用金黄色葡萄球菌(ATCC29213)和大肠埃希菌(ATCC25922)验证配制的抗菌药物浓度。
5.MPe试验株液相改变单位(CCU)和菌落形成单位(CFU)的选定:取试验菌株,选定CCU跟CFU。
6.MPe试验株最小杀菌浓度(MBCs)和最小抑菌浓度(MICs)测定:MBCs(Minimalbactericidalconcentration)测定采用微量法(96孔),MICs(Minimalinhibitoryconcentrations),采用平板法,参照文献[6,7]操作进行。
结果:30株分离自肿瘤患者的MPe的结果:MICs以克林霉素和左旋氧氟沙星最低(0.078μg/ml),其它依次为:环丙沙星(0.156μg/ml)、红霉素(0.156μg/ml)、氯霉素(0.312μg/ml)、氧氟沙星(8μg/ml)、庆大霉素(10μg/ml)。MBCs最低的是克林霉素和左旋氧氟沙星(0.156μg/ml)。15株分离自IgA肾病的MPe的结果:各种药物对MPe的MICs以红霉素最低,为0.031μg/ml,其次为左旋氧氟沙星和克林霉素(0.078μg/ml)。MBCs最低的是红霉素(0.031μg/ml),其次是氯霉素(0.125μg/ml)、左旋氧氟沙星和克林霉素(0.156μg/ml)。
结论:本研究为肿瘤和IgA肾病病人MPe感染的临床治疗提供实验依据。