商品用检测甲基苯丙胺的胶体金检测试纸条,因其快速、操作简便、不易污染的特点得到广泛的应用,市场巨大。但国内还没有开展对其原材料甲基苯丙胺抗原的研究和生产,因而市场上缺乏由国产材料制成的成型产品,市场上的产品均系进口国外原料国内组装或直接代销的国外产品。 鉴于国内甲基苯丙胺胶体金检测试剂条的现状,研究甲基苯丙胺半抗原合成以及偶联制得甲基苯丙胺抗原,有利于降低成本,开发出自己的甲基苯丙胺胶体金检测试纸条,具有经济意义,有助于胶体金检测行业的发展。 制备甲基苯丙胺胶体金试剂盒,其中一种重要的原料是甲基苯丙胺抗原。甲基苯丙胺是一种小分子物质,其分子量小于1000,本身不具有抗原性,在免疫学上属于半抗原类。因此,为了建立甲基苯丙胺免疫学检测方法,需要合成甲基苯丙胺抗原,这就需要将甲基苯丙胺链接到大分子物质(也称载体蛋白)上。 为了使甲基苯丙胺能与大分子结合,其结构上需要具备羧基或者胺基基团。考虑到甲基苯丙胺的结构特点,本研究对其进行亲核反应引入胺基基团。反应过程通过薄层层析色谱法进行监测和控制,对反应条件如反应原料浓度、温度、时间、反应物的比例等条件进行了探索,选择了合适条件,成功地合成了能够进行偶联蛋白载体的甲基苯丙胺半抗原。随后,选择牛血清白蛋白BSA作为载体蛋白,戊二醛为偶联剂,与甲基苯丙胺半抗原进行偶联连接,并对偶联的反应物用量进行了探索,选择最佳偶联用量,合成了甲基苯丙胺抗原。 根据免疫层析原理和胶体金试纸条结构,本研究采用竞争法,即甲基苯丙胺的代谢物和硝酸纤维膜(Nitrocellulose membrane.NC)上的甲基苯丙胺抗原竞争胶体金标记的甲基苯丙胺抗体这一基本原理,制备了胶体金检测试剂盒。制备的甲基苯丙胺胶体金试纸条所用甲基苯丙胺抗原浓度为0.2 mg/ml,抗体喷涂量为30μg/m2,灵敏度为1000ng/ml,符合中国药品生物制品检定所规定的筛选最低值；与吗啡、氯氮平、苯巴比妥、美沙酮、安定、咖啡因、可卡因等常用的麻醉品、滥用药物无交叉反应,结果显示清楚,从而首次完成了自主获得合成甲基苯丙胺抗原并在胶体金试纸条上的成功应用。