第一章两肾一夹高血压大鼠辣椒素敏感感觉神经活性的变化研究背景降钙素基因相关肽(CGRP)是辣椒素敏感感觉神经的重要肽类递质,为目前已知舒血管作用最强的物质,对局部血流量和血压的调节起着重要的作用.自发性高血压大鼠CGRP的合成和释放均降低,可能这是高血压发生、发展的重要原因;而在去氧皮质酮-盐高血压大鼠,CGRP合成和释放表现为代偿性增高,以部分对抗血压的升高.已往研究表明,肾性高血压的发展也涉及神经机制,但有关辣椒素敏感感觉神经活性的变化,目前尚未见文献报道.因此,该实验检测CGRP的合成与释放,并以辣椒素为工具药耗竭感觉神经递质CGRP,探讨两肾一夹高血压大鼠辣椒素敏感感觉神经活性的变化.结论两肾一夹高血压大鼠辣椒素敏感感觉神经活性增高,以部分对抗血压的升高,该代偿作用主要是由α-CGRP介导.第二章降钙素基因相关肽与苯酚诱导的神经性高血压第一节降钙素基因相关肽在苯酚诱导的神经性高血压中的作用研究背景降钙素基因相关肽(CGRP)是辣椒素敏感感觉神经的重要肽类递质,为目前发现的舒血管作用最强的物质,对心血管功能调节有重要的作用.CGRP主要由背根神经节内初级感觉神经元合成,这些神经元发出周围突起分布到全身血管,通过轴突反射释放CGRP以调节血管张力;发出中枢轴突到脊髓参与血压调节.在实验性高血压动物中,因诱导高血压方法的不同,CGRP在高血压发生、发展中的作用各异.已往研究表明,自发性高血压大鼠背根神经节CGRP mRNA表达、脊髓背角CGRP含量及血浆CGRP水平均降低,并认为这是其血压升高的重要原因.相反,最近我们研究表明,两肾一夹高血压大鼠CGRP合成和释放代偿性增加,以部分对抗血压的升高.在苯酚诱导的神经性高血压的发生发展中,肾传入神经活性的改变起着重要的作用,但在该模型中辣椒素敏感感觉神经活性的变化未见报道.因此,本实验以辣椒素为工具药来探讨感觉神经递质CGRP在该高血压模型发生发展中的作用.方法健康雄性SD大鼠,左肾下极注射10％苯酚50μl制备高血压模型(下文称"苯酚-高血压大鼠").实验分组:①正常对照组(Normal):②假手术组(Sham),动物左肾下极注射50μl生理盐水;③苯酚-高血压组(Phenol);④苯酚-高血压+辣椒素组(Ph+Cap),肾内注射苯酚后5天皮下给予辣椒素(50 mg/kg);⑤苯酚-高血压+辣椒素溶媒组(Ph+Veh),术后5天皮下给等体积辣椒素溶媒(10％无水酒精+10％吐温-80+80％生理盐水);⑥单纯辣椒素组,正常动物在相应时间点给予等量辣椒素.术前测定动物基础血压,术后15天测平均动脉压、血浆CGRP浓度(放免法)、背根神经节CGRP mRNA表达(RT-PCR)以及脊髓背角CGRP含量(免疫组化及图像分析技术).结果动物基础血压各组差异无显著性.肾内注射苯酚使动物血压显著升高.CGPR8-37对已升高的平均动脉压无明显影响.苯酚-高血压大鼠背根神经节CGRP mRNA(α和β亚型)表达、脊髓背角CGRP含量及血浆CGRP水平均降低,辣椒素能进一步降低脊髓及血浆中CGRP水平,但并不能加剧高血压的发展.结论苯酚-高血压大鼠CGRP(α和β亚型)合成和释放的降低是其高血压发生发展的重要原因.第二节苯酚诱导大鼠高血压的神经机制:交感神经与辣椒素敏感感觉神经的相互作用研究背景交感缩血管神经和感觉舒血管神经广泛分布于全身血管组织,这两种神经通过释放多种血管活性物质共同调节血管舒缩功能,以维持循环稳定.阻力血管舒缩功能的失调是高血压发生发展和得以维持的重要基础.CGRP是辣椒素敏感感觉神经的重要肽类递质,为迄今已知舒血管作用最强的物质,对血压和局部血流量调节起着重要的作用.有关苯酚诱导大鼠高血压的发病机制,已往的研究主要集中在交感神经,而较少涉及辣椒素敏感感觉神经.前文工作已证明,在大鼠苯酚诱导的神经性高血压可能与辣椒素敏感感觉神经活性降低有关.文献报道,去甲肾上腺素能抑制辣椒素敏感感觉神经活性,我们推测,苯酚诱导的高血压大鼠感觉神经活性降低可能继发于交感神经活性增局.因此,该实验在该模型探讨了辣椒素敏感感觉神经和交感神经的相互作用.另有研究证明,自发性高血压大鼠动脉组织中神经生长因子(NGF)的异常表达是高血压发生发展的重要原因,故在本实验中我们也观察了动脉NGF含量的变化.方法健康雄性SD大鼠左肾下极注射10％苯酚50μl制备苯酚-高血压模型.15天后动物随机分成7组:①假手术对照组;②假手术+哌唑嗪组;③假手术+育亨宾组;④高血压组;⑤高血压+哌唑嗪组;⑥高血压+育亨宾组;⑦高血压+哌唑嗪+育亨宾组.哌唑嗪和育亨宾溶于水灌胃,每日总剂量分别为3和5 mg/kg.监测动物尾动脉收缩压(每天给药前),隔天一次.给药14天,左颈总动脉插管测平均动脉压(MacLab实验记录系统).测压结束后,取血及颈、胸、腰段背根神经节测CGRP含量.另取一批动物,分组及处理同前,用于检测肠系膜上动脉CGRP阳性神经纤维密度、主动脉及肠系膜上动脉NGF含量.结果高血压动物血浆CGRP浓度、背根神经节CGRP含量、肠系膜上动脉CGRP阳性神经纤维密度均降低.主动脉及肠系膜上动脉中膜NGF含量降低.哌唑嗪能使血压完全恢复正常,但它并不影响CGRP水平及动脉NGF含量;相反,育亨宾并不影响血压,但能显著增加CGRP水平及动脉NGF含量.两者合用则能使以上指标均恢复正常水平.结论该实验结果提示,交感神经活性增强及辣椒素敏感感觉神经活性降低均是促进苯酚-高血压发生发展的重要原因,而辣椒素敏感感觉神经活性的降低可能是继发于交感神经活性增高激动感觉神经末梢α2受体.该实验同时也提示动脉NGF含量的降低可能与激动α2受体有关.第三章吴茱萸次碱降压作用及机制的研究--促进降钙素基因相关肽合成与释放研究背景高血压是最常见的心血管疾病,中国35-74岁的人群中,其发病率高达27％.高血压直接并发症有脑血管意外、肾功能衰竭和心力衰竭,而且高血压患者容易并发冠心病.这些并发症大多可致死或致残,严重威胁人类的健康和生命.因此,高血压的防治已成为心血管领域中一项最为重大的研究课题.已知中枢与外周血管组织主要受交感缩血管神经和感觉舒血管神经支配,这两种神经能释放多种血管活性物质,共同调节心血管功能,以维持循环稳定.血管阻力主要由缩血管物质与舒血管物质两者净效应决定的.阻力血管在调节血压和局部血流量中起着重要的作用,其舒缩功能的失调则是高血压发病的重要原因.因此,促进内源性舒血管物质生成与释放是寻找抗高血压药物的重要途径.吴茱萸是一种传统的中药,内服或外敷都能有效治疗高血压.近年来,国内外学者对其化学成分和药理作用进行了深入研究,发现其主要活性成分吴茱萸碱(evodiamine)和吴茱萸次碱(rutaecarpine)具有强大的舒血管作用,可有效降低血压;在离体豚鼠心房肌吴茱萸次碱通过激动辣椒素受体(VR1)促进CGRP释放而发挥正性肌力和正性频率作用.我们最近工作也证明,在正常大鼠吴茱萸次碱的舒血管与降压作用与激动辣椒素受体促进CGRP释放有关.基于吴茱萸次碱能促进CGRP释放及CGRP的强效扩血管作用,所以该实验拟进一步探讨:①吴茱萸次碱能否在高血压大鼠产生稳定的降压作用;②其降压机制是否与促进CGRP合成和释放有关.方法雄性SD大鼠制备苯酚-高血压模型.实验分以下两部分:实验一单次静脉给予吴茱萸次碱对苯酚-高血压大鼠的影响实验分设8组:高血压组、吴茱萸次碱溶媒组、三个剂量吴茱萸次碱组(30、100、300μg/kg)、辣椒素加吴茱萸次碱组、辣椒素溶媒加吴茱萸次碱组以及辣椒素受体阻断剂capsazepine加吴茱萸次碱组.动物右颈总动脉、颈静脉插管分别以测压和给药.给药后待血压降至最低点时,断头取血测血浆CGRP.实验二长期经胃给予吴茱萸次碱对苯酚-高血压大鼠的影响实验分设5组:对照组、高血压组、两个剂量吴茱萸次碱组(3、6 mg/kg/d)、辣椒素加吴茱萸次碱组.吴茱萸次碱溶于0.5％羧甲基纤维素钠,每天分两次灌胃.监测尾动脉收缩压(给药前测)隔天一次,给药12天后测平均动脉压、血浆CGRP浓度、背根神经节CGRP含量及CGRP mRNA表达、脊髓CGRP含量及肠系膜上动脉CGRP神经纤维密度.结果苯酚-高血压大鼠CGRP合成和释放降低.静脉给予吴茱萸次碱能剂量依赖性地升高血浆CGRP水平及降低血压,CGRP耗竭剂辣椒素及辣椒素受体阻断剂Capsazepine分别能取消吴茱萸次碱降压作用的85％和80％,阻断促进CGRP释放作用两者均为90％.慢性经胃给予吴茱萸次碱能使苯酚-高血压大鼠CGRP合成和释放增加并能产生稳定的降压作用.预先给予辣椒素能阻断吴茱萸次碱降压作用的65％,取消吴茱萸次碱促进CGRP合成的作用,并显著降低血浆CGRP水平.结论该实验首次证明,吴茱萸次碱在苯酚-高血压大鼠的降压机制与激动辣椒素受体促进CGRP的合成和释放有关.