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以中国兽药监察所分离、鉴定的中国伪狂犬病病毒（Pseudorabies vires，PRV）主要流行标准毒株Min-A株为实验材料，接种已长成单层的PK-15细胞增殖病毒。待85％的细胞出现细胞病变后收获细胞。将收获的细胞经-20℃和37℃反复3次冻融后，超声粉碎，低速离心收集上清液，再以超速离收获病毒。用专用试剂盒提取病毒基因组DNA，作为gE PCR扩增的模板；参照已公开发表的PRV-Rice株gE基因的序列设计了一对用于特异性扩增gE基因的引物，经PCR扩增后得到了大小约1.7kb的条带。用T4DNA连接酶使gE基因与经BamHI、KpnI同样双酶切的pUC19质粒DNA连接；用连接产物转化大肠杆菌JMl09感受态细胞，置含Amp、X-gal和IPTG的LB平板上培养12～20小时；挑取白色菌落于选择性培养基扩大培养，碱裂解法小量提取质粒DNA，并进行酶切分析鉴定，结果获得整合有PRV gE基因的重组质粒pUgE DNA，并与其它PRV分离株进行gE基因序列同源性分析。 将重组质粒pUgE DNA与转移载体pFastBacl DNA用BamHI和EcoRI双酶切处理，T4DNA连接酶连接，用连接产物转化大肠杆菌JM109感受态细胞，得到重组转移载体质粒pFastBac-gE DNA。重组转移载体转化含穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，于选择性平板上37℃培养，挑取发生转座作用生成的白色菌落，于选择性培养基中扩大培养，碱裂解法小量提取重组Bacmid DNA，并做酶切分析鉴定，命名为rBacmid-gE DNA。将纯化的rBacmid-gE DNA用Ca3（PO4）2沉淀法转染昆虫细胞sf9，收集转染细胞，500g低速离心后，上清即为收获的重组病毒液，命名为rvBac-gE。对重组病毒进行PCR鉴定，电泳结果显示扩增片段的大小与预期值相符，gE基因重组、克隆正确。为下一步进行gE基因的表达、为建立PRV强、弱毒鉴别诊断gE-ELISA方法奠定了物质基础。