论文部分内容阅读
研究目的从全球各个国家来看,蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)都是致死和致残的重要的疾病之一。在过去,蛛网膜下腔出血的研究主要集中在蛛网膜下腔出血后的脑血管痉挛。但至目前为止,有效治疗蛛网膜下腔出血后脑损伤的方法尚未发现。新的研究资料认为蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤(Early brain injury, EBI)是蛛网膜下腔出血患者死亡的一个重要原因。蛛网膜下腔出血后,发生神经组织广泛的细胞凋亡,特别是海马(Hippocampus,HIP)神经元的凋亡,这些组织细胞的凋亡参与了EBI发生发展的病理过程。因此,减轻SAH后EBI可以有效地降低蛛网膜下腔出血患者的死亡率,从而改善SAH患者的神经功能。近期的研究表明,在48小时内孕酮对脑损伤具有明显的神经保护作用,可以减轻组织损害,恢复和改善创伤性脑损伤,稳定血脑屏障和减少脑水肿,抑制脂质过氧化,减少谷氨酸盐的释放,尤其是可以减轻神经细胞的凋亡。由于目前孕酮对SAH后EBI的研究较少,孕酮对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的作用仍不十分清楚。我们假设：孕酮可能通过抑制细胞凋亡减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤。因此,本研究通过制备大鼠蛛网膜下腔出血模型,探讨孕酮对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用及其可能机制。研究方法1.实验对象选择标准：48只SD(Sprague Dawley,SD)雄性大鼠,体重在250g至300g之间,随机分配到三个实验组,假手术对照组(Sham control group,sham组)、蛛网膜下腔出血组(Subarachnoid hemorrhage group,SAH组)、和孕酮治疗组(Progesterone treatment group,PG组)。2.蛛网膜下腔出血模型的建立：利用自体血二次注入枕大池法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型,48h后取脑。3.给药：孕酮治疗组分别于24h给予16mg/kg的孕酮腹腔注射,假手术对照组和蛛网膜下腔出血组则给予相同剂量的生理盐水。4.凋亡的检测：海马神经元的组织形态学变化应用苏木素-伊红(HE)染色观察；海马神经元凋亡应用原位末端标记法(TUNEL)检测；大鼠海马中Bcl-2、Bax的表达运用免疫组织化学法检测。5.统计学分析：应用SPSS18.0统计学软件对所得资料进行统计分析,数据以x±s表示。应用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.孕酮对细胞凋亡的影响：Sham对照组无明显TUNELP日性细胞发现,而SAH组阳性细胞数明显增多(P<0.05)；应用孕酮治疗组凋亡数目明显少于SAH组,且具有统计学意义(P<0.05),PG组与Sham组相比凋亡细胞增多(P<0.05)。2.免疫组化法检测凋亡相关基因发现,与蛛网膜下腔出血组相比,孕酮组促凋亡蛋白Bax表达下降(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达升高(P<0.05),并且海马凋亡细胞数显著减少。因此,孕酮可能通过促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制促凋亡蛋白Bax的水平,升高Bcl-2与Bax之间的比值,进而抑制海马神经元的凋亡,对SAH后EBI发挥脑保护作用。结论孕酮可能通过抑制大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤神经元的凋亡,减轻大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤。